Контроль качества дезинфекции

Контроль качества дезинфекции проводится: визуально, химическим и бактериологическим способами.

Визуальный контроль – оценивается санитарное состояние помещения, кратность и своевременность проведения текущей дезинфекции и генеральной уборки, соблюдение правил приготовления растворов дезинфектантов и использование дезинфицирующей аппаратуры.

Химический контроль - определение концентрации рабочих и готовых растворов дезинфектантов, концентратов дезпрепаратов. Контроль проводят с помощью экспресс тестов (бумажные полоски-тесты и соответствующая цветовая шкала соответствия) и путем проведения химического анализа в специализированных лабораториях. Экспресс контроль проводят ежедневно, а химический анализ с кратностью, которая определена соответствующими указаниями к каждому виду дезинфектанта.

Бактериологический контроль проводится в рамках санитарно-бактериологического контроля (СБК). Порядок организации СБК качества дезинфекции определен приказом МЗ СССР №254 от 1991г. «О развитии дезинфекционного дела в стране» и профильными приказами. Вместе с тем. Согласно письму МЗ РФ от 2001г. Проведение СБК качества дезинфекции целесообразно проводить только по эпидемическим показаниям и в случае неудовлетворительного санитарного состояния помещения. Рутинное проведение СБК мало информативное, и очень затратное мероприятие. Перечень объектов для СБК качества дезинфекции должен определяться заведующим отделения совместно эпидемиологом в зависимости от особенностей и направленности отделения. Основное направление исследований – контроль качества обработки изделий медицинского назначения, применяемых у пациентов без стерилизации. В случае необходимости эпидемиолог может расширить показания к проведению контроля. Кратность проведения СБК 2 – 4 раза в год.

Вопрос7.бактериоскопический метод диагн.разреш.способн,+ - методы окраски препаратов,значение для диагн и терапии.

Бактериоскопический (микроскопический) метод

совокупность способов обнаружения и изучения морфологических и тинкториальных св-в бактерий (микробов) в лабораторной к-ре, патологическом материале или в пробах из внешней среды с помощью микроскопии. Применяют для установления д-за инфекц. заболевания или иного вызванного микробами процесса, а также при идентификации выделенной чистой к-ры. В лабораторной практике используют следующие типы микроскопических препаратов: 1) висячую каплю (см.); 2) придавленную каплю (см); 3) тонкий мазок (см.) крови, гноя, мокроты и др.; 4) толстую каплю (см.); 5) агар-микроскопию (см.); 6) препарат-отпечаток (см.); 7) фиксированный мазок. В бактериол. практике чаще применяют последний тип препарата. Приготовление его состоит из нескольких этапов: 1) забора и доставки материала для исследования (см.); 2) приготовления препарата. Для этого иссл. материал наносят на чистое, обезжиренное предметное стекло с помощью бактер. петли и распределяют по площади в 1 см². Плотный (густой) материал или к-ру из плотной среды вносят бактер. петлей в каплю физраствора, тщательно размешивают и распределяют по стеклу на таком же пространстве, как и в предыдущем случае. Величина вносимого материала зависит от предполагаемого количества бактерий в нем. Препарат должен быть таким, чтобы наступило хорошее прокрашивание и обесцвечивание всех бактерий и чтобы была возможность наблюдать за единичными бактериями; 3) приготовленный мазок высушивают на открытом воздухе или в теплой струе воздуха (от газовой горелки или воздушного полотенца); 4) препарат фиксируют на стекле для обеспечения безопасности дальнейшей работы, прикрепления бактерий к стеклу, лучшего восприятия ими краски, поскольку структуры убитых бактерий легче и прочнее воспринимают красители; 5) фиксированные мазки окрашивают одним из простых или специальных методов крашения (см. Крашение микробов), погружая мазок в краситель или наливая его на препарат так, чтобы вся поверхность препарата была покрыта сплошным слоем красителя, и хорошо просушивают на воздухе. Плохо высушенный препарат дает мутное изображение при иммерсионной микроскопии из-за образования эмульсии; 7) микроскопии мазка. Ценность Б.м. состоит в простоте, доступности методик и быстроте получения результатов (30 - 60 мин и менее). Однако специфичность его в связи с близостью морфологии разных видов мала, чувствительность ограничена (около 10⁵ бактерий в 1 мл), информация, полученная с его помощью, невелика. Результаты Б.м. обычно можно использовать как ориентировочные в основном для индикации высоких таксонов. Ценность Б.м. резко возрастает при исследовании простейших, грибов и обработке препарата люминесцирующими с-ками (см. Иммунофлюоресцентный метод).

Простая окраска. Рабочий раствор краски из капельницы или пипетки наносят на 2—3 мин. на фиксированный мазок.

Более интенсивного окрашивания достигают увеличением продолжительности окрашивания или подогреванием на спиртовой лампочке до появления паров. Если препарат перекрашен, то можно частично удалить краску обильным промыванием водой или непродолжительным промыванием спиртом. Более сильное средство обесцвечивания — промывание препарата 5-проц. раствором серной кислоты или 15-проц. раствором азотной кислоты.

Специальные окраски. Окраска по Граму позволяет делить всех микробов на две группы: на микроорганизмы, положительно красящие по Граму (грамположительные микробы), и на микробов, отрицательно красящихся по Граму (грамотрицательные микроорганизмы).

Принцип окраски по Граму основан на том, что положительно красящиеся по Граму микробы имеют в своем поверхностном слое вещества (рибонуклеат магния с белками), которые при окрашивании парарозанилиновыми красками (генцианвиолет, кристаллвиолет, метилвиолет, викторияблау) в присутствии иода дают прочные соединения, не разрушающиеся спиртом. Микробы, отрицательнэ красящиеся по Граму, в своем составе не имеют таких веществ и потому при окрашивании этими красками в присутствии иода не дают прочных соединений, и при действии спирта обесцвечиваются.

Окраска по Граму. Высушивание мазка; фиксация; окраска феноловым генцианвиолетом — 2—3 мин.; обработка раствором Луголя (1,0 иода; 2,0 иодистого калия и 300,0 дестиллированной воды) — 2—3 мин., обесцвечивание 70° спиртом до серостального цвета (цвет дыма папиросы) — около 10 сек.; промывание водой; окрашивание контрастной краской (водным раствором сафранина, раствором эозина или фуксином Пфейфера) в течение 2—3 мин.; обмывание водой; высушивание фильтровальной бумагой. Грамположительные микробы красятся в темнофиолетовый цвет, а грамотрицательные — в красный.

Окраска кислотоупорных микроорганизмов по Циль-Нильсену. Высушивание мазка; фиксация; окрашивание феноловым фуксином Циля — 1—3 мин. с подогреванием до появления паров; промывание водой; обесцвечивание 5-проц. раствором серной или 15-проц. раствором азотной кислоты до исчезновения розовой окраски — 2— 5 сек.; промывание водой; дополнительная окраска метиленовой синью — 0,5—1 мин. Кислотоупорные микроорганизмы окрасятся в красный цвет, прочие в синий.

Окраска по Козловскому (бруцелл в патологическом материале). Мазок фиксируют, красят 2-проц. водным раствором сафранина с подогреванием до появления первых пузырьков газа, промывают водой, дополнительно красят 1-проц. раствором малахитовой зелени 0,5—1 мин. Бруцеллы яркокрасные, фон зеленый.

Окраска спор по Мёллеру. Высушивание мазка; фиксация; действие 5-проц. раствором хромовой кислоты — 1—2 мин.; промывание водой; окрашивание фуксином Циля с подогреванием до появления паров; обесцвечивание 5-проц. раствором серной или 15-проц. раствором азотной кислоты; промывание водой; дополнительное окрашивание контрастной краской — метиленовой синью 0,5—1 мин. Споры красные, вегетативные формы микробов синие.

Окраска капсул основана на явлении метахромазии, т. е. способности одной краски окрашивать различные по химическому составу части микроба в различные цвета. Некоторые способы окраски капсул основаны на контрастной окраске.

Способ Ольта. Фиксированный препарат красят 1—2 мин., при нагревании, 4-проц. водным раствором сафранина; смывают водой; не высушивая, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом. Микробы красные, а капсулы оранжевожелтые.

Способ Ребигера. Препарату дают хорошо высохнуть; без фиксации красят 20 сек. раствором генцианвиолета (15—20 а) в 40-проц. формалине (100—150 г); обмывают водой, исследуют. Капсулы фиолетоворозовые; бациллы темнофиолетовые.

Способ Романовского — Гимза. Фиксированный препарат кра-сится краской Романовского—Гимза (1—2 капли на 1,0 дестилли-рованной воды) в течение 10—15 мин., а затем быстро смывается водой и сушится фильтровальной бумагой. Бациллы тем носи ни е, капсулы розовые.

Способ Клетта. Фиксированный препарат красят 2—3 мин. метиленовой синью, с подогреванием до появления паров; обильно промывают водой; красят фуксином Пфейфера 5 сек.; быстро промывают водой. Микробы синие, капсулы розовые.

Вопрос8.культуральный метод диагностики,разреш спос.,+ -

Посев — один из стационарных методов культивирования микроорганизмов на питательных средах, применяемый для культуральной диагностики в медицинской микробиологии, а также для исследования биохимических и биологических свойств в различных биотехнологических целях. В зависимости от содержания исследуемых бактерий в образце, проводят посев на плотные питательные среды (для получения изолированных колоний и определения чистоты культуры). Если в исследуемом материале содержание микроорганизмов незначительное, то посев проводят на жидкие среды обогащения. Различают различные методы посева ^[1].

Бактериологический метод диагностики – изучает физиологические свойства микроорганизмов.

• Совокупность однородных микроорганизмов, выросших на питательной среде, обладающая сходными морфологическими, тинкториальными, культуральными, биохимическими и антигенными свойствами называется чистой культурой.
• Штамм – это чистая культура микроорганизма, выделенная из определенного источника и отличающаяся от других представителей вида.
• Клон – совокупность особей, выращенных из одной микробной клетки.
• Колония – потомство одной микробной клетки.

Этапы микробиологического исследования:1 день исследования – посев биоматериала на питательные среды с целью получения изолированных колоний
2 день исследования – выделение чистой культуры – изучение культуральных свойств.
3 день исследования – идентификация чистой культуры микроорганизмов – изучение физиологических свойств микроорганизмов.
4 день исследования – учет результата и выдача ответа.

При выращивании бактерий применяют стационарный способ, способ глубинного культивирования с аэрацией и метод проточных питательных сред. В соответствии со способами выращивания бактериальные культуры разделяют на периодические (при стационарном и глубинном культивировании) и непрерывные (при проточном культивировании).

Стационарный способ — наиболее часто используемый на практике. Состав сред остаётся постоянным, с ними не проводят никаких дополнительных манипуляций.

Способ глубинного культивирования применяют при промышленном выращивании бактериальной биомассы, для чего используют специальные котлы-реакторы. Они снабжены систе­мами поддержания температуры, подачи в бульон различных питательных веществ, переме­шивания биомассы и постоянной подачи кислорода. Создание аэробных условий по всей толще среды способствует протеканию энергетических процессов по аэробному пути, что способствует максимальной утилизации энергетического потенциала глюкозы и, следователь­но, максимальному выходу биомассы.

Метод проточных сред (промышленный способ культивирования) позволяет постоянно под­держивать бактериальную культуру в экспоненциальной фазе роста, что достигают постоянным внесением питательных веществ и удалением определённого числа бактериальных клеток. Пре­бывание бактерий в экспоненциальной стадии роста обеспечивает максимальный выход различ­ных БАВ (витамины, антибиотики и др.).

Первичная идентификация бактерий

В большинстве случаев изучение особенностей роста для первичной идентификации возбу­дителей проводят на колониях, выросших в течение 18-24 ч. Характер роста бактерий на раз­личных средах может дать много полезной информации. На практике используют сравнительно небольшой набор критериев. В жидких средах обычно учитывают характер поверхностного (образование плёнки) или придонного роста (вид осадка) и общее помутнение среды. На твёр­дых средах бактерии формируют колонии — изолированные структуры, образующиеся в результате роста и накопления бактерий. Колонии возникают как следствие роста и размноже­ния одной или нескольких клеток. Таким образом, пересев из колонии в дальнейшем даёт возможность оперировать с чистой культурой возбудителя. Рост бактерий на плотных сре­дах имеет больше характерных особенностей.

Гемолиз

Некоторые бактерии выделяют гемолизины — вещества, разрушающие эритроциты. На КА их колонии окружают зоны просветления. Образование гемолизинов (и соответственно — раз­меры зон гемолиза) может быть вариабельным, и для адекватного определения гемолитической активности следует просматривать чашки с посевами против источника света (рис. 1-14). Активность гемолизинов может проявляться в полном или неполном разрушении эритроцитов.

α-Гемолиз. Разрушение эритроцитов может быть неполным, с сохранением клеточной стромы. Подобный феномен называют α-гемолиз. Просветление среды вокруг колоний обычно незначительно, позднее среда вокруг колоний может приобретать зеленоватую окраску. Подобный рост характерен для пневмококка, а также для группы так называемых зеленя­щих стрептококков.

β-Гемолиз. Гораздо большая группа бактерий вызывает полное разрушение эритроцитов, или β-гемолиз. Их колонии окружены прозрачными зонами различного размера. Например, Streptococcus pyogenes и Staphylococcus aureus образуют большие зоны гемолиза, a Listeria monocytogenes или Streptococcusagalactiae — небольшие, диффузные зоны. Для определения гемолитической активности не следует применять шоколадный агар (ША), так как образующи­еся зоны α- или β-гемолиза не имеют характерных особенностей и вызывают одинаковое позеленение среды.

Размеры и форма колоний

Важные признаки колоний — их размеры и форма. Колонии могут быть большими или мелкими. Величина колоний — признак, позволяющий различать различные виды, роды и даже типы бактерий.

Способы культивирования анаэробов. Все ма­нипуляции с анаэробами осуществлятся в бескислородных условиях. Для этого используют герметичные камеры с газовым составом среды. Посевы производят на специальные обогатительные (электив­ные) среды для анаэробов (тиогликолевую, Китта—Тароцци). Посевы инкубируют в специальных СО2-инкубаторах или в анаэростатах, которые помещают в обычный термостат. Для инкубации небольших по объему посевов (1—2 чашки Петри) приме-

няют пластиковые пакеты, содержащие газовую смесь, которая обеспечивает полное удаление кислорода из воздуш­ной среды в течение нескольких минут.

В большинстве случаев ко­лонии грамположительных бактерий мель­че колоний грамотрицательных бактерий. Колонии бактерий могут быть плоскими, приподнятыми, выпуклыми, иметь вдавлен­ный или приподнятый центр. Другой важный признак — форма краёв колоний. При изучении фор­мы колоний учитывают характер её поверх­ности: матовый, блестящий, гладкий или ше­роховатый. Края колоний могут быть ров­ными, волнистыми, дольчатыми (глубоко изрезанными), зубчатыми, эрозированными, бахромчатыми и т.д. Размеры и формы ко­лоний часто могут изменяться. Подобные изменения известны как диссоциации. Наиболее часто обнаруживают S- и R-ducсоциации. S-колонии круглые, гладкие и выпуклые, с ровными краями и блестящей поверхностью. R-колонии — неправильной формы, шероховатые, с зубчатыми краями.

Цвет колоний

При просмотре посевов также обращают внимание на цвет колоний. Чаще они бесцветные, белые, голубоватые, жёлтые или бежевые; реже — красные, фиолетовые, зелёные или чёрные. Иногда колонии ирризируют, то есть переливаются всеми цветами радуги [от греч. iris, радуга]. Окрашивание возникает в результате способности бактерий к пигментообразованию. На специ­альных дифференцирующих средах, включающих специальные ингредиенты или красители, ко­лонии могут приобретать разнообразную окраску (чёрную, синюю и др.) за счёт включения красителей либо их восстановления из бесцветной формы. В данном случае их окраска не связана с образованием каких-либо пигментов.

Консистенция колоний и особенности роста на среде

Полезную информацию могут дать консистенция колоний и особенности роста на среде. Обычно эту информацию можно получить при прикосновении к колониям петлёй. Колонии могут легко сниматься со среды, врастать в неё или вызывать её коррозию (образуя трещины и неровности). Консистенция колоний может быть твёрдой или мягкой. Мягкие колонии — маслянистые или сливкообразные; могут быть слизистыми (прилипают к петле) или низкими (тянущимися за петлёй).

Твёрдые колонии — сухие, восковидные, волокнистые или крошковатые; могут быть хрупкими и ломаться при прикосновении петлёй.

Запах

Запах — менее важный признак колоний, поскольку вызываемые им ассоциации носят субъективный характер. В частности, культуры синегнойной палочки имеют запах карамели, культуры листерий — молочной сыворотки, протеев — гнилостный запах, нокардий — свежевскопанной земли.

Биохимические методы идентификации бактерий

Методов, используемых для идентификации особенностей метаболизма бактерий, очень много, но на практике применяют небольшое их количество. Большинство способов основано на использовании дифференциально-диагностических сред, включающих различные индикаторы.

Способность к ферментации углеводов

Способность к ферментации углеводов оценивают по изменению окраски среды вследствие образования органических кислот (соответственно, происходит уменьшение рН), вызывающих изменение окраски индикатора.

«Пёстрый» ряд. Для определения сахаролитической активности применяют среды Хисса; в их состав входят 1% пептонная вода (или МПБ), индикатор Андраде и один из углеводов. При расщеплении углевода происходит изменение цвета среды с жёлтого на красный. Поскольку бактерии различают по способности ферментировать те или иные углеводы, то ряды пробирок приобретают пёстрый вид. Поэтому этот набор сред и называют «пёстрый» (или цветной) ряд.

Стеклянные поплавки. Для определения способности микроорганизмов ферментировать уг­леводы с образованием кислоты и газа в сосуды со средами вносят стеклянные поплавки (запаянные с одного конца короткие трубочки), всплывающие после наполнения их газом.

Расщепление белков

Некоторые бактерии проявляют протеолитическую активность, выделяя протеазы, катализи­рующие расщепление белков. Наличие протеолитических ферментов из группы коллагеназ оп­ределяют при посеве уколом в МПЖ. При положительном результате наблюдают его разжиже­ние в виде воронки либо послойно сверху вниз. Способность к расщеплению белков и амино­кислот также можно оценивать по изменению окраски среды, так как образующиеся продукты — аммиак, индол и сероводород — сдвигают рН в щелочную сторону, вызывая изменение окраски индикатора.

Образование аммиака. Для определения способности к образованию NH₃проводят посев в МПБ, и между его поверхностью и пробкой закрепляют полоску лакмусовой бумаги. При положительном результате бумажка синеет.

Образование индола и H₂S. Обычно для определения способности к образованию индола и сероводорода также проводят посев в МПБ, между его поверхностью и пробкой закрепляют бумажки: в первом случае пропитанные раствором щавелевой кислоты {при образовании индола бумажка краснеет), во втором — раствором ацетата свинца (при образовании H₂S бумажка чернеет). Также используют специальные среды, содержащие индикаторы (напри­мер, среда Клиглера), либо их вносят непосредственно в среду после регистрации видимого роста бактерий.

Тест на нитратредуктазную активность

Этот тест используют для идентификации отдельных видов бактерий. Он позволяет опреде­лить способность восстанавливать нитраты в нитриты. Способность к восстановлению NO₃ в N0₂, определяют культивированием в МПБ, содержащем 1% раствор KNO₃. Для определения нитритов в среду добавляют несколько капель реактива Грисса. При положительном резуль­тате наблюдают появление красного кольца.

Хроматография

Хроматографические методы используют для идентификации бактерий и установления их систематического положения. Объекты для исследования — жирные кислоты клеточной стенки, уникальные интермедиаты и конечные метаболиты жизнедеятельности бактерий. Хроматографические системы обычно сопрягают с компьютерами, что значительно упрощает учёт результатов. Наиболее распространена идентификация жирных короткоцепочечных и тейхоевых кислот методом газожидкостной хроматографии. Жидкостной хроматографией под высоким давлением идентифицируют миколевую кислоту в клеточных стенках микобактерий. Тонкослойную хроматографию используют для идентификации изопреноидных хинонов клеточной стенки бактерий. У различных родов их содержание и набор различны, но постоянны, что позволяет установить систематическое положение каждого конкретного вида.

Индикаторные бумажки

Для изучения биохимической активности бактерий широко применяют системы индикаторных бумажек или наборы мультимикротестов.

Система индикаторных бумажек (СИБ) — набор дисков, пропитанных различными субстратами. Их можно непосредственно вносить в пробирки со взвесью бактерий либо предварительно поместить в лунки пластиковых планшетов, куда будут внесены исследуемые бактерии. Так, на практике применяют наборы Minitek Enterobacteriaceaelll и Minitek Neisseria для дифференциальной диагностики энтеробактерий (четырнадцать субстратов) и нейссерий (четыре субстрата), позволяющие получить результаты через 4 ч инкубации при 37 ⁰С.

Наборы мультимикротестов — пластиковые планшеты, в лунки которых помещены различные субстраты и индикаторы. В лунки вносят различные разведения бактерий и инкубируют при 37 °С. На практике используют тесты RapID NH для идентификации нейссерий и гемофилов, RapID Е для энтеробактерий и др., позволяющие получить результаты не позднее 4-8часов

Классный сайт http://bibliofond.ru/view.aspx?id=6805

Поиск по сайту: