Иммунохроматографический анализ

Это метод определения низких концентраций веществ в биологических материалах. К таким материалам относятся цельная кровь, сыворотка или плазма крови, слюна, моча, кал.

ИХА – сравнительно молодой метод анализа, он часто обозначается в литературе также как метод сухой иммунохимии, стрип-тест, QuikStrip cassette, QuikStrip dipstick, экспресс-тест или экспресс-анализ.

Все иммунологические методы анализа основаны на реакции "антиген – антитело". Антиген – это вещество, которое узнается нашим организмом как чужеродное и которое может запускать иммунную (защитную) реакцию. Антитела – это белки, которые образуются клетками нашего организма в ответ на внедрение в него антигена. Наиболее важным свойством антител является их способность специфически связываться с антигеном. Это означает, что каждое антитело (Ат) узнает и связывается только с определенным антигеном (Аг).

Рис.9.13 Исследуемый антиген	Рис.9.14 Антитело, чувствительное к исследуемому антигену и закрепленное на тест-полоске
Рис.9.15 Коньюгат антитела, специфичного к исследуемому антигену, с красителем, мигрирующем вдоль полоски, вместе с физиологической жидкостью	Рис.9.16 – Вторичное антитело, специфичное к антителам с красителем, иммобилизованное на тест-полоске.

При погружении теста в физиологическую жидкость она начинает мигрировать вдоль полоски по принципу тонкослойной хроматографии Вместе с жидкостью двигаются антитела с красителем. Если в этой жидкости присутствует исследуемый антиген, то происходит его связывание, как с первым, так и со вторым типом антител. При этом происходит накопление антител с красителем вокруг антител, жестко иммобилизованных в тест-зоне ИХА-полоски, что проявляется в виде яркой темной полосы. Не связавшиеся антитела с красителем мигрируют далее вдоль полоски и неизбежно взаимодействуют с вторичными антителами в контрольной зоне, где и наблюдается вторая темная полоса. Взаимодействие (и темная полоса) в контрольной зоне должны проявляться всегда (если анализ проведен правильно), независимо от присутствия исследуемого антигена в физиологической жидкости.

Существуют следующие варианты результатов тестирования: 1) две полосы – положительный результат; 2) одна полоса – отрицательный результат; 3) нет полос – анализ проведен неправильно.

Рис. 9.17 Появление двух полос на тесте

ИХА-тесты чрезвычайно просты в употреблении и обладают высокой чувствительностью, до нескольких нанограмм на мл объекта. Однако при этом следует учитывать тот факт, что эти тесты обладают низкой селективностью и требуют обязательного подтверждения положительного результата другими аналитическими методами. На практике они используются в клинических или судебно-химических лабораториях как средство быстрого отбора среди большого количества образцов, требующих дальнейшего исследования.

Поиск по сайту: