Диагностические сыворотки (агглютинирующие, преципитирующие, антитоксические, люминесцирующие) и иммуноглобулины

Диагностические сыворотки и иммуноглобулины используются для идентификации или типизации возбудителей инфекционных болезней или для обнаружения антигена в исследуемом материале путем постановки серологических реакций. Название сывороток связано с содержанием в них различных типов антител, которые дифференцируют на агглютинирующие, преципитирующие, антитоксические, флуоресцирующие, в зависимости от вида серологической реакции.

Диагностические сыворотки получают путем многократного парентерального введения по определенным схемам инактивированного очищенного концентрированного или нативного корпускулярного или растворимого антигена животным-продуцентам с последующим взятием у них крови и отделением сывороток.

Полученные сыворотки подвергают адсорбции, консервированию фенолом или тиомерсалом, фасуют, высушивают лиофильным методом и контролируют на стерильность по вышеописанной методике, на специфичность и активность в серологических реакциях (РА, РП, РН, РДП, РИФ, РНГА, РТГА) с определением диагностического титра (предельное разведение сыворотки, при котором регистрируется положительная серологическая реакция).

Агглютинирующие сыворотки. Промышленность выпускает групповые лептоспирозные сыворотки, монорецепторные О- и Н-агглютинируюшие сыворотки, агглютинирующие О-коли сыворотки, листериозные и кампилобактериозные агглютинирующие сыворотки.

Получение агглютинирующих О-коли сывороток. Для этого изолированно выращивают высоко агглютинабельные культуры эшерихий определенных серогрупп на агаре Хоттингерв 18-20- часов при 37С, смывают физраствором в стерильную емкость (каждую культуру отдельно), доводят концентрацию до 2 млрд клеток в 1 мл, прогревают в водяной бане при 100 С в течение одного часа и полученный антиген используют для гипериммунизации кроликов.

Антиген вводят в ушную вену с интервалом 3-5 дней в дозах 0,3; 0,6; 1; 2; 3 мл. Через 8-10 дней после последней инъекции антигена животных обескровливают. Кровь берут в стерильные цилиндры иглой со шлангом из сонной артерии или из сердца, выдерживают в термостате при 37 С 30 минут, отделяют сгусток, одни сутки выдерживают при 4-5 С, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут, сливают в стерильные емкости, консервируют борной кислотой (1-2%) и выдерживают не менее 2-х месяцев при 4-5 С для выпадения неустойчивых фракций белков сыворотки и стабилизации титров. Отстоявшуюся сыворотку фильтруют через пластинки СФ фильтра Зейтца, проверяют на стерильность, разливают по 1-2 мл в стерильные ампулы и запаивают. Активность с ывороток определяют в капельной (на стекле) и пробирочной РА. Сыворотки, разведенная 1:10, в капельной РА должна давать положительную реакцию с антигеном эшерихий соответствующей серогруппы, а в пробирочной реакции агглютинационный титр должен быть не менее 1:3200. Специфичность сыворотки проверяют в пробирочной РА с антигенами двух гетерологичных серогрупп эшерихий. РА должна быть отрицательной в титрах 1:100 и выше.

Преципитирующие сыворотки. Получение преципитирующих сывороток аналогично получению агглютинирующих сывороток. Например, преципитирующую сибиреязвенную сыворотку получают гипериммунизацией лошадей живым сибиреязвенным антигеном, составленным из культур слабовирулентных вакцинных штаммов 916-1, Ш-15 и 2-й вакцины Ценковского, выращенного на гороховом агаре. В течение всего цикла гипериммунизации делают 16-17 подкожных и внутривенных инъекций в нарастающих с 5 до 70 мл дозах. Кровь беоут через 9-10 дней после завершения гипериммунизации в количестве 800мл с каждых 50 кг массы лошадей после предварительной проверки активности преципитирующей сыворотки. Сыворотку получают методом цитрирования крови с последующим сепарированием и дефибринизацией плазмы, которую затем консервируют 0,5% фенола, отстаивают в течение двух месяцев и фильтруют через асбестовые пластины Ф, а затем СФ и фасуют в стерильные флаконы.

Контроль преципитирующей сыворотки выполняется по аналогии с контролем агглютинирующей сыворотки с учетом некоторых особенностей, обусловленных их назначением.

Для ветеринарных целей биологическая промышленность выпускает преципитирующую сибиреязвенную сыворотку.

Поиск по сайту: