Контроль диагностических сывороток

Контроль за качеством сывороток осуществляют на всех стадиях их изготовления. После производственного контроля каждая серия сывороток поступает в отдел биологического и технологического контроля (ОБТК), где проверяют ее физические свойства, стерильность, безвредность, специфическую активность после 20-суточной выдержки при 37° С. Кроме того, определяют содержание в сыворотке белка, водородных ионов (рН), электрофоретическую чистоту, апирогенность, остаточное содержание солей и другие показатели.

Физические свойства сывороток обычно определяют визуально. Нативная сыворотка должна быть прозрачной или иметь легкую опалесценцию. Допускается образование небольшого осадка, легкоразбивающегося в равномерную взвесь. Она должна быть без признаков повышенной вязкости. Сухая, сыворотка, должна иметь определенный процент влажности (не более 6%) и легко растворяться в течение 1--2 минут.

Контроль на стерильность сыворотки осуществляется путем высева ее на среды для исключения контаминации бактериями (МПА, МПБ с глюкозой, МППБ под маслом) и грибками (агар Сабуро, среда Чапека).

Безвредность сывороточных препаратов проверяют на морских свинках массой по 300--400 г, когда им подкожно вводят 10 мл сыворотки по 5 мл с обеих сторон. Иногда для этих целей используют кроликов. Животные, получившие сыворотку, должны оставаться здоровыми, не иметь заметных местных или общих реакций б течение 10-суточного наблюдения. Если такие изменения имеются, то контроль повторяют на удвоенном количестве животных. При повторном неудовлетворительном результате контроля на безвредность вся серия препарата бракуется.

Специфичность сывороток каждого типа проверяют в реакции нейтрализации на белых мышах с токсинами А, С, D и Е. Типовые сыворотки нейтрализуют токсины соответствующих типов. При положительной реакции нейтрализации белые мыши не погибают (Кириллов Л. В., Каган Ф. И., 1981).

Активность диагностических агглютинирующих сывороток (например, сальмонеллезные монорецепторные О- и Н-агглютннирующие сыворотки, агглютинирующие О-коли сыворотки) определяют в пробирочных РА и на стекле с соответствующими стандартными антигенами из убитых микроорганизмов. Специфичность диагностических сывороток определяют в РА с гетерологичными культурами микроорганизмов, не имеющих антигенных родственных связей, и культурами одной-двух серогрупп микроорганизмов, родственных по антигенному составу.

Аллергены

Аллергены относятся к группе диагностических препаратов, представляющих собой микробные белки и продукты жизнедеятельности микроорганизмов. Применение аллергенов основано на явлении инфекционной аллергии, т.е. гиперчувствительности замедленного типа в ответ на введение в ранее инфицированный организм гомологичного (соответствующего) антигена.

Методика приготовления аллергенов индивидуальна для каждого препарата.

Туберкулин применяют для аллергической диагностики туберкулеза сельскохозяйственных животных и пушных зверей. Туберкулин для КРС готовят из туберкулезных бактерий типа M. Bovis, M.tuberculosis, для птиц - M.avium.

Для приготовления очищенных туберкулинов (ППД) применяют синтетические среды.

Для приготовления ППД-туберкулина используют туберкулиногенные штаммы соответствующего вида возбудителя туберкулеза, которые в течение 2-х месяцев выращивают на модифицированной безбелковой среде Сотона, затем стерилизуют автоклавированием и белок туберкулезных микобактерий осаждают трехлоруксусной кислотой. Образовавшийся преципитат белка отделяют от культуральной жидкости центрифугированием, вновь осаждают белок полунасыщенным раствором сернокислого аммония и после повторного центрифугирования, отделения от надосадочной жидкости и растворения в дистиллированной воде раствор белка подвергают диализу в целлофановой оболочке против водопроводной воды при температуре не более 8 С для удаления остатков сернокислого аммония и других солей. Полученный раствор подщелачивают 10% раствором аммиака, фильтруют через стерилизующие асбестовые платины, проверяют на стерильность и содержание белка, расфасовывают в ампулы или флаконы и лиофилизируют. Таким образом, основной фракцией ППД-туберкулина является белок туберкулезных микобактерий, содержание которого составляет 73,4-90%. В состав ППД-туберкулина входит 4-5% полисахаридов, 1-2% нуклеиновых кислот и до 11% липидов.

Очищенный туберкулин (ППД) для млекопитающих представляет собой аморфную массу желтоватого или сероватого оттенка, состоящую из осажденных белков культурального фильтрата возбудителей туберкулеза бычьего и человеческого типов, выращенных на синтетической питательной среде. Очищенный туберкулин для птиц является аналогом очищенного туберкулина для млекопитающих, но его готовят из штаммов возбудителя туберкулеза птиц.

Все туберкулины проверяют на стерильность, безвредность, активность и специфичность. Безвредность туберкулинов проверяют на белых мышах (2 недели наблюдают должны выжить), активность – на инфицированном крупном рогатом скоте в сравнении показаний испытуемого и заранее известного (стандартного) туберкулина. Степень выраженности реакций на испытуемый аллерген должна соответствовать стандартному аллергену.

Туберкулин для птиц проверяют на туберкулезных курах; специфичность туберкулинов – на здоровом крупном рогатом скоте (отсутствует реакция на его введение), а птичьего туберкулина – на здоровых курах.

С диагностической целью в ветеринарной практике применяют аллеогены – бруцеллин ВИЭВ, ППД-туберкулин, маллеин для диагностики сапа.

В медицинской практике:

1. при туберкулезе – проба Манту с туберкулином

2. при хронической форме дизентерии – проба Цуверкалова с дизентерином

3. при гонореи – проба с гоновакциной

4. при бруцеллезе – проба Бюрне с бруцеллином

5. при туляремии – проба с туляремином

6. при сибирской язве – проба с антраксином.

Бактериофаги

Бактериофаги представляют собой вирусы, поражающие бактерии и вызывающие их разрушение - лизис. Открытие явления лизиса у возбудителя сибирской язвы впервые зафиксировал отечественный ученый Н. Ф. Гамалея еще в 1898 году. Однако причины такого лизиса оставались невыясненными. В 1915 году Творт выделил особый фильтрующийся агент, который вызывал лизис колоний стафилококка. В 1917 году д,Эррель такой агент выделил из испражнений больного тяжелой формой бактериальной дизентерией. Этот агент вызывал растворение культур возбудителя дизентерии. Фильтрация растворенной культуры и новые добавления фильтратов к свежим культурам приводили к их лизису. Такой переносимый из культуры в культуру литический агент д,Эррелем был назван бактериофагом. В последующем, в сороковые годы, с помощью электронного микроскопа удалось подтвердить, что бактериофаг является вирусом. В настоящее время фаги выявлены почти у всех патогенных и многих непатогенных прокариотных микроорганизмов, у энтеробактерий, микобактерий, коринебактерий, стрептококков, стафилококков, сардин, споровых и актиномицетов. Бактериофаги широко распространены в природе. Практически они обнаруживаются во всех объектах среды, где обитают микроорганизмы.

Применение бактериофагов в качестве диагностических препаратов основано на явлении специфического лизиса фагами соответствующих видов или вариантов бактерий. Для приготовления, например, сибиреязвенного бактериофага «К» ВИЭВ выващивают авирулентный штамм возбудителя сибирской язвы на дрожжевом агаре. Бульоне или МПБ и засевают фаг с активностью не ниже 10-8, инкубирую при 37 С 10-18 часов, фильтруют через стерилизующие асбестовые пластины СФ, расфасовывают по флаконам и проверяют на стерильность по общепринятой методике, специфичность и активность. На специфичность – путем посева в культуры ложносибиреязвенной бациллы и выдержки в условиях термостата (37С). Лизис бактериальной массы должен отсутствовать. На активность бактериофаг проверяют на вакцинных и вирулентных штаммах возбудителя сибирской язвы, которые он должен лизировать в титре не ниже 10-8.

Для фагодиагностики в ветеринарной практике применяются сибиреязвенные фаги, листериозные, стафилококковые, бруцеллезный, О-сальмонеллезный, колифаги энтеропатогенных эшерихий.

Поиск по сайту: