 |
АвтоАвтоматизацияАрхитектураАстрономияАудитБиологияБухгалтерияВоенное делоГенетикаГеографияГеологияГосударствоДомДругоеЖурналистика и СМИИзобретательствоИностранные языкиИнформатикаИскусствоИсторияКомпьютерыКулинарияКультураЛексикологияЛитератураЛогикаМаркетингМатематикаМашиностроениеМедицинаМенеджментМеталлы и СваркаМеханикаМузыкаНаселениеОбразованиеОхрана безопасности жизниОхрана ТрудаПедагогикаПолитикаПравоПриборостроениеПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРадиоРегилияСвязьСоциологияСпортСтандартизацияСтроительствоТехнологииТорговляТуризмФизикаФизиологияФилософияФинансыХимияХозяйствоЦеннообразованиеЧерчениеЭкологияЭконометрикаЭкономикаЭлектроникаЮриспунденкция
Ход работы. В стерильные колбы объемом 250 мл налить последовательно 80 мл исследуемого образца, по 2,5 мл растворов 2 и 3
В стерильные колбы объемом 250 мл налить последовательно 80 мл исследуемого образца, по 2,5 мл растворов 2 и 3, 5,0 мл раствора 4. В качестве контроля вместо исследуемого образца добавить 80 мл стерильной воды. Затем добавить 10 мл предварительной культуры. Оптическая плотность инокулята должна составлять примерно 0,1 опт. ед. (кювета 10 мм, λ=600 нм), для того чтобы начальная плотность при биотестировании составляла 0,01 опт. ед. Измерить реальную начальную оптическую плотность в контрольном варианте. Повторность опыта и контроля – трехкратная.
Инкубировать контрольные и опытные варианты при температуре 230С±10С в темноте при перемешивании в течение 16 часов.
По истечении периода инкубации измерить конечную оптическую плотность культуры.
Оценка и обработка результатов
Процент ингибирования роста клеток рассчитывают по формуле:
I = (Вс-Вn) *100 / (Bc-B0), где
I - ингибирование роста клеток микроорганизмов, выраженное в
процентах;
Вn - конечная оптическая плотность микроорганизмов после 16-
часовой инкубации в опытном образце;
Вс - конечная оптическая плотность микроорганизмов после 16-
часовой инкубации в контрольном образце;
Во - начальная оптическая плотность микроорганизмов в контрольном
образце;
Если экспериментально не удалось получить точного значения кратности разбавления, вызывающего 50%-ное ингибирование роста культуры микроорганизмов, то для получения точного значения ЛКр50 без выполнения дополнительных экспериментов используется графический метод.
Графический метод определения ЛКр50
Чтобы получить на графике линейную зависимость, используют пробит анализ. Результаты выполненных экспериментов по установлению токсического действия заносятся в табл. 1.
Значения пробитов, соответствующие установленной кратности разведения, вызывающей снижение оптической плотности образцов. Находят по табл. 2. Процентные концентрации исследуемых образов переводят в десятичные логарифмы. По значениям пробитов и десятичных логарифмов от экспериментально полученных данных строят график.
Таблица 1
Концентрация экстракта и показатели токсичности (пример)
| Концентрация экстракта С, % | lg С | Токсичность, % | Значения пробитов |
| 3,12 | 0,494 | - | |
| 6,25 | 0,796 | 3,45 | |
| 12,50 | 1,097 | 4,42 | |
| 25,0 | 1,398 | 5,2 | |
| 50,0 | 1,699 | 6,08 | |
| 100,0 | 2,000 | - |
По оси абсцисс откладывают значения логарифмов процентных концентраций исследуемых образцов, по оси ординат – пробиты значений процента изменения оптической плотности образцов. Экспериментально полученные значения вносят в систему координат и через точки проводят прямую. Пробитное значение 5 соответствует 50%-ному ингибированию роста микроорганизмов (табл. 2).
Таблица 2
Значения пробитов, соответсвующих экспериментально устанавливаемой токсичности
| Токсичность, % | ||||||||||
| - | 2,67 | 2,95 | 3,12 | 3,25 | 3,35 | 3,45 | 3,52 | 3,59 | 3,66 | |
| 3,72 | 3,77 | 3,82 | 3,83 | 3,92 | 3,96 | 4,01 | 4,05 | 4,08 | 4,12 | |
| 4,16 | 4,19 | 4,23 | 4,26 | 4,29 | 4,33 | 4,36 | 4,39 | 4,42 | 4,45 | |
| 4,48 | 4,50 | 4,53 | 4,56 | 4,59 | 4,61 | 4,64 | 4,67 | 4,69 | 4,72 | |
| 4,75 | 4,77 | 4,80 | 4,82 | 4,85 | 4,87 | 4,90 | 4,92 | 4,95 | 4,97 | |
| 5,00 | 5,03 | 5,05 | 5,08 | 5,10 | 5,13 | 5,15 | 5,18 | 5,20 | 5,23 | |
| 5,25 | 5,28 | 5,31 | 5,33 | 5,36 | 5,39 | 5,40 | 5,44 | 5,47 | 5,50 | |
| 5,52 | 5,55 | 5,58 | 5,61 | 5,64 | 5,67 | 5,71 | 5,74 | 5,77 | 5,81 | |
| 5,74 | 5,88 | 5,92 | 5,95 | 5,99 | 6,04 | 6,08 | 6,13 | 6,18 | 6,23 | |
| 6,28 | 6,34 | 6,41 | 6,48 | 6,55 | 6,64 | 6,75 | 6,88 | 7,05 | 7,33 |
Из точки пересечения координаты пробитного значения 5 и проведенной прямой опускают перпендикуляр на ось абсцисс, точка пересечения является логарифмом концентрации исследуемой пробы, вызвавшей 50%-ное ингибирование роста микроорганизмов за 16 часов экспозиции. Затем найденный логарифм концентрации исследуемого образца переводят в процентную концентрацию.
Таким образом, устанавливают среднюю летальную концентрацию разбавления исследуемого образца, вызывающего 50%-ное ингибирование роста тест-объектов за временную экспозицию
Поиск по сайту: