ГЛАВА 4. В данной главе приводятся результаты исследований сезонных вариаций суточных ритмов сократительной функции сердца и сосудистого тонуса интактных кроликов

СУТОЧНО-СЕЗОННЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ СИСТЕМЫ ЖИВОТНЫХ

4.1. Общие сведения

В данной главе приводятся результаты исследований сезонных вариаций суточных ритмов сократительной функции сердца и сосудистого тонуса интактных кроликов непараметрическими методами математической статистики.

Экспериментальные материалы, использованные для анализа, охватывают исследования за период 1984-1985 гг. и получены на 480 кроликах при условиях эксперимента и методами, описанными в Главе 2.

Исследования проводились 21-23 июня 1984г, 21-23 сентября 1984г, 21-23 декабря 1984г и 21-23 марта 1985г.

Следует подчеркнуть, что для анализа сезонных зависимостей использовались также и показатели активности лизосомных ферментов печени кроликов.

У кроликов после регистрации функциональных показателей производили экстирпацию печени, помещали в ледяной буферный раствор для гомогенизации следующего состава: 0.33 М сахароза (х. ч), 1 мМ ЭДТА (Serva, ФРГ), 3.8 мМ триэтаноламин рН 7.25.

При температуре 0-4°С печень отмывали, очищали от соединительной ткани, измельчали ножницами и гомогенизировали в стеклянном гомогенизаторе Поттера-Эвелгейма с тефлоновым пестиком (зазор- 0.21 мм) в течение 180с при 40 об/с. Гомогенат 1:10 подвергали дифференциальному центрифугированию (Ruth, 1978) на ультрацентрифуге L8-M фирмы "Beckman" (CШA). Получали лизосомный супернатант (надосадочная жидкость) и обогащенную лизосомами фракцию (осадок), которую ресуспендировали 1:5 в буферном растворе 0.7 М сахарозы, 1 мМ ЭДТА (Serva, ФРГ), рН = 7.0. О структурной целостности лизосом судили по величине активности лизосомных ферментов в различных фракциях.

Изучаемые активности лизосомных ферментов (см. Список сокращений в Главе2):

1. Активность ферментов, определяемая в супернатанте, обозначалась как свободная или неседиментируемая активность - NSA.

2. Активность ферментов, определяемая в обогащенном лизосомном осадке и доступная для субстрата, характеризовалась как доступная активность – EA.

3. После дезинтеграции мембран лизосом методом замораживания и оттаивания (С. Buya et al., 1978) определялась общая активность – CA.

4.2. Результаты тестов на нормальность распределения

Как уже отмечалось в Главе 2 (2.1.7 и 2.1.8.), для корректного выбора статистического метода исследований и выявления зависимостей исследуемых харакетристик от внешних факторов необходимо было произвести оценку распределения значений исследуемых медицинских параметров. Следует отметить, что из анализа распределения параметров сразу же можно сделать предварительный вывод о том, сколько функциональных систем участвует в формировании и регуляции данного параметра. Если, например, параметр имеет нормальное или близкое к нормальному распределение, то он, по всей очевидности, задействован в одной функциональной системе. Если распределение существенно отличается от нормального, то можно с уверенностью утверждать, что параметр задействован в нескольких функциональных системах одновременно.

На основе обобщения результаты тестов на нормальность распределения данных в рассматриваемом эксперименте, была построена круговая диаграмма (Рис.10), из которой видно, что 83% рассматриваемых параметров в течение года имеют значения, не подчиняющиеся нормальному закону распределения.

Рис. 10. Характер распределения данных в годичной выборке и в каждый сезон отдельно (черным цветом обозначены показатели, имеющие нормальное распределение).

Как свидетельствуют наши исследования, нормальное распределение за годичный цикл имеют только параметры APMAX, VPREALLV, AHCO₃, VHCO₃. Перечисленные параметры имеют ненормальное распределение только в один из четырех сезонов, главным образом, осенью и зимой. Для VPREALLV – это зимний сезон, для APMAX- осень, для AHCO₃, VHCO₃ - осень и зима соответственно. Очевидно, можно предположить, что данные показатели являются “ведущими” в тех функциональных системах, которые заняты их регулированием, и их роль в течение года не изменяется. Функциональная система, поддерживающая оптимальный для метаболизма уровень артериального давления, включает в себя сразу несколько типов регуляции: гемодинамический, нервный, гуморальный. Функциональная система, поддерживающая оптимальный для метаболизма уровень рН в крови, включает в себя несколько буферных систем. Судя по характеру распределения, карбонатный буфер является наиболее стабильным.

В каждый сезон отдельно отношение нормально рапределенных параметров к параметрам с ненормальным распределением существенно изменяется. Так ненормальное распределение имеют 75% параметров в весенний период, 71% параметров в летний период, 83% в осенний период и 58% в зимний сезон (Рис. 10).

4.3. Проверка на достоверность существования сезонных вариаций

Проведенный в предыдущем параграфе анализ свидетельствует, что большая часть изучаемых параметров не подчиняется нормальному распределению. В то же время, как уже отмечалось, в книге Чибисова С.М., Овчинниковой Л.К. и Бреус Т.К. (1998) были выявлены выраженные сезонные эффекты в используемых здесь функциональных характерисиках кроликов линейными статистическими методами, фактически опирающимися на гипотезу о нормальности их распределения. Поэтому на первом этапе анализа в данной работе была осуществлена проверка наличия сезонных различий с помощью непараметрического рангового критерия Краскела – Уоллиса.

Было сделано предположение, что различия значений показателей, полученных в ходе эксперимента в разные сезоны, случайны, и данные являются выборками из непрерывного распределения с равными медианами. Таким образом, была сформулирована нулевая гипотеза для сезонных вариаций. Для всех переменных был вычислен Н-критерий Краскела-Уоллиса.

Таблица 6

Значения H-критерия Краскела Уоллиса при сравнении сезонных выборок.

Из Таблицы следует, что во всех случаях Н-критерий превышал критические значения (см. Главу 2), p< 0,001. Таким образом, гипотеза об отсутствии сезонных различий должна быть отклонена: у всех показателей имеются статистически значимые существенные сезонные различия. Отсюда можно было заключить, что наличие сезонных вариаций не является артефактом, вызванным применением в книге Чибисова С.М., Овчинниковой Л.К. и Бреус Т.К. (1998) параметрических методов, опирающихся на гипотезу о нормальности. Очевидно, что параметры характеризуются достаточно сильными связями, и качественные выводы, полученные в Главе 4 упомянутой книги, можно считать справедливыми, несмотря на ограниченность использованных авторами методов.

В данной работе для выявления сезонных различий в значениях функциональных показателей сердечно-сосудистой системы кроликов были применены непараметрические методы статистики. В целом применение непараметрических методов, основанных на рангах, незначительно загрубляет результаты, делая анализ менее чувствительным к выбросам. Тем не менее, такие методы успешно выделяют главные закономерности, а также вскрывают многофункциональные дополнительные связи, не выявляемые линейными методами.

4.4. Результаты кластерного анализа сезонных изменений структуры связей между показателями.

Изучение структуры сезонных связей исследуемых характеристик сердечно-сосудистой системы и активности лизосомных ферментов печени кроликов проводилось по описаной в разделе 2.1.8. Главы 2 методике кластерного анализа.

Для исследования были выбраны группы по 120 животных в каждый сезон.

4.4.1. Весенний сезон

Рис.11. Дендрограмма, изображающая результаты кластерного анализа показателей в весенний сезон, полученная методом Уорда.

Как можно видеть из Рис.11, параметры, связанные с поддержанием активной реакции крови (VHCO₃- уровень НСО₃ в венозной крови_., VBE- избыток оснований в венозной крови_., AHCO_3., AВЕ_., VPH_., APH_.) а также показатели APCO₂ и VPCO₂ (парциальное давление СО₂ в артериальной и венозной крови) образуют плотный кластер (темная штриховка на рисунке), наиболее удаленный от остальных показателей. Второй кластер состоит из показателей активности лизосомных ферментов печени (NSA, EA,CA) и части показателей газового состава (APO₂ , VPO_2- - парциального давления О₂ в артериальной и венозной крови).

Отдельный кластер образуют показатели, характеризующие деятельность сердечно-сосудистой системы. В него группируются показатели артериального давления (APMAX_., APMIN_.), пульсовое давление PP и показатель VPMAXLV- внутрижелудочковое давление максимальное в левом желудочка). Далее присоединяются остальные показатели внутрижелудочкового давления VPMAXRV (то же, но в правом желудочке сердца), VPREALLV VPREALRV (внутрижелудочковые давления реальные в левом и правом желудочках сердца), напряжение кислорода в венозной крови VPO₂ с показателем геомагнитной активности АР и показатели гемоглобина в венозной и артериальной крови (VHB, AHB_.). Необходимо отметить, что наиболее тесная связь среди показателей внутрижелудочковых давлений отмечена между показателями правого желудочка.

Факторный анализ, проведенный с данными весенней выборки, выделил 7 главных факторов. Первый фактор объединяет показатели VHCO_3., VBE_., AHCO_3., ABE_., VPH, APH_.. Второй – показатели внутрижелудочкового давления. Третий - показатели лизосомной активности CA, EA, NSA. Четвертый –параметры VPCO_2. и APCO₂ . Пятый - показатели гемоглобина. Шестой – артерио-венозную разницу и напряжение кислорода в артериальной крови. Седьмой – артериальное и пульсовое давление.

Таким образом, факторный анализ в весенний сезон выделяет те же структурные элементы, что и кластерный анализ по методу Уорда.

4.4.2. Летний сезон.

Рис.12. Дендрограмма, отображающая результаты кластерного анализа показателей в летний сезон, полученная методом Уорда.

Как можно видеть из Рис.12, параметры, связанные с поддержанием активной реакции крови (VHCO₃, VВЕ_., AHCO_3., AВЕ_., VPH, APH) образуют плотный кластер, наиболее удаленный от остальных показателей. Второй кластер состоит из показателей лизосомной активности (CA, NSA, EA), объединенных с показателями кислорода (AVPO₂, APO_2., VPO₂) и показателями гемоглобина в венозной и артериальной крови (VHB_., AHB_.).

Отдельные кластеры образуют показатели, характеризующие деятельность сердечно-сосудистой системы. В первый кластер группируются показатели артериального давления (АDMAX, АDMIN_.) и пульсовое давление PP. Второй кластер содержит все показатели внутрижелудочковых давлений (VPMAXRV, VPMAXLV, VPREALLV, VPREALRV). В летний сезон показатели внутрижелудочковых давлений объединены попарно в симметричную структуру, что, очевидно, свидетельствует о синхронности регуляторных процессов в сердце. В кластер показателей сердечно-сосудистой системы входит кластер, содержащий показатели VPCO₂ , APCO₂. _.В этот кластер также входит показатель геомагнитной активности AP.

Факторный анализ, проведенный с данными летней выборки, выделил 8 главных факторов. Первый фактор объединяет показатели VHCO_3., VВЕ_., AHCO_3., AВЕ_., VPH, APH_.. Второй – параметры VPCO_2. и APCO₂. Третий - показатели внутрижелудочкового давления. Четвертый – артериальное и пульсовое давление. Пятый - показатели лизосомной активности CA, NSA, EA. Шестой – артерио-венозную разницу и напряжение кислорода в артериальной крови. Седьмой - показатели гемоглобина. Восьмой - напряжение кислорода в венозной крови.

Таким образом, факторный анализ в летний сезон выделяет те же структурные элементы, что и кластерный анализ по методу Уорда. Этот факт подтверждает достоверность классификации показателей.

4.4.3. Осенний сезон

Рис. 13. Дендрограмма, отображающая результаты кластерного анализа показателей в осенний сезон, полученная методом Уорда.

Как видно из Рис.13, параметры, характеризующие поддержание активной реакции крови (VHCO₃, VВЕ, AHCO_3., AВЕ, VPH_., APH) а также показатели APCO₂ и VPCO_2. образуют плотный кластер, значительно удаленный от остальных показателей. Второй кластер состоит из показателей лизосомной активности (CA, NSA, EA), показателей VPO₂ и АР, а также показателей AVPO₂ и APO₂ .

Отдельный кластер образуют показатели, характеризующие деятельность сердечно-сосудистой системы. В него группируются показатели артериального давления (ADMAX, ADMIN_.), пульсовое давление PP и показатель VPMAXLV. Далее присоединяются показатели гемоглобина в венозной и артериальной крови (AHB, VHB_.) и остальные показатели внутрижелудочкового давления (VPMAXRV, VPREALRV, VPREALLV). Необходимо отметить, что наиболее тесная связь среди показателей внутрижелудочковых давлений снова отмечена между показателями правого желудочка.

Факторный анализ, проведенный с данными осенней выборки, выделил 7 главных факторов. Первый фактор объединяет показатели VHCO_3., VВЕ, AHCO₃, AВЕ_., VPH, APH. Второй – показатели внутрижелудочкового давления. Третий - показатели лизосомной активности СА, NSA и EА. Четвертый –параметры VPCO₂ и APCO₂. Пятый - артерио-венозную разницу по кислороду. Шестой – показатели гемоглобина. Седьмой – артериальное и пульсовое давление.

Таким образом, факторный анализ в осенний сезон выделяет те же структурные элементы, что и кластерный анализ по методу Уорда. Это свидетельствует о достоверности классификации, полученной методами кластерного анализа.

4.4.4. Зимний сезон.

Рис. 14. Дендрограмма, отображающая результаты кластерного анализа показателей в зимний сезон, полученные методом Уорда.

Параметры, связанные с поддержанием активной реакции крови (VHCO₃, VВЕ_., AHCO_3., AВЕ, VPH, APH_.) образуют плотный кластер (Рис. 14), наиболее удаленный от остальных показателей. Второй кластер состоит из показателей парциального давления углекислого газа в крови (VPCO₂ , APCO_2.), показателей геомагнитной активности AP и VPO₂, показателей лизосомной активности (CA, NSA, EА). Последними ко второму кластеру присоединяются показатели AVPO₂ и APO₂ .

Отдельные кластеры образуют показатели, характеризующие деятельность сердечно-сосудистой системы. В первый кластер группируются показатели артериального давления (АDMAX, АDMIN) и показатели гемоглобина в венозной и артериальной крови (VHB, AHB_.). Второй кластер содержит все показатели внутрижелудочковых давлений (VPMAXLV, VPMAXRV, VPREALRV, VPREALLV) и пульсовое давление PP. В зимний сезон показатели внутрижелудочковых давлений объединены попарно в симметричную кластерную структуру.

Факторный анализ, проведенный с данными зимней выборки, выделил 7 главных факторов. Первый фактор выделяет в качестве главных компонент показатели VHCO_3., VВЕ, AHCO₃, AВЕ, VPH_., APH. Второй – показатели внутрижелудочкового давления. Третий - параметры VPCO₂ и APCO₂. Четвертый – показатели лизосомной активности NSA и EА. Пятый - показатели гемоглобина и артериальное давление. Шестой – не выделил достоверных главных компонент, но ведущую роль в нем играют показатели APO₂ и AVPO₂. Седьмой – VPO₂.

Таким образом, факторный анализ в зимний сезон выделяет те же структурные элементы, что и кластерный анализ по методу Уорда. Этот факт подтверждает корректность группировки показателей, полученной методами кластерного анализа.

.4.5. Анализ суточных выборок данных в осенний сезон, относящихся к высокой геомагнитной активности

Осенний период эксперимента характеризовался повышенным значением геомагнитной активности. Это обстоятельство вызвало необходимость провести анализ суточных выборок из данных осеннего эксперимента. Проводился кластерный анализ данных по методу Уорда и методу k-средних (приведены результаты, полученные методом Уорда).

Первые сутки (21.09. 1984)

Рис. 15. Дендрограмма, отображающая результаты кластерного анализа показателей за первые сутки эксперимента в осенний сезон, полученные методом Уорда.

В первые сутки осеннего эксперимента наиболее удаленный от остальных показателей кластер состоит из показателей лизосомной активности (CA, NSA, EA), к которым присоединяются показатели AVPO₂ и APO₂ (Рис.15).

Параметры, характеризующие поддержание активной реакции крови (VHCO_3., VВЕ, AHCO₃, AВЕ, VPH, APH) образуют плотный кластер, в состав которого также входят показатели парциального давления углекислого газа в крови (VPCO₂, APCO₂).

Отдельный кластер образуют показатель геомагнитной активности AP и показатель VPO₂ с показателями гемоглобина в венозной и артериальной крови (VHB, AHB_.).

Показатели, характеризующие деятельность сердечно-сосудистой системы группируются следующим образом: показатели артериального давления (ADMAX_., ADMIN_.); показатели внутрижелудочковых давлений (VPMAXRV, VPREALRV, VPREALLV); пульсовое давление PP и VPMAXLV.

Вторые сутки (22.09.1984)

Рис. 16. Дендрограмма, отображающая результаты кластерного анализа показателей во вторые сутки эксперимента в осенний сезон, полученная методом Уорда.

Во вторые сутки осеннего эксперимента наиболее удаленный от остальных показателей кластер состоит из показателей лизосомной активности (CA, NSA, EА), к которым присоединяются показатель геомагнитной активности AP и показатель VPO₂ (Рис 16).

Параметры, характеризующие поддержание активной реакции крови (VHCO_3., VВЕ, AHCO_3., AВЕ, VPH, APH) образуют, как и в первые сутки, плотный кластер, в состав которого также входят показатели парциального давления углекислого газа в крови (VPCO_2., APCO₂).

Отдельный кластер образуют показатели внутрижелудочковых давлений (VPMAXRV, VPREALRV, VPREALLV, VPMAXLV).

Показатели, характеризующие артериальное давление (ADMAX_., ADMIN_.) и пульсовое давление PP группируются с показателями гемоглобина в венозной и артериальной крови (VHB_., AHB_.). Далее к ним присоединяются показатели AVPO₂ и APO₂ .

Третьи сутки (23.09.1984)

Рис. 17. Дендрограмма, отображающая результаты кластерного анализа показателей за третьи сутки эксперимента в осенний сезон, полученные методом Уорда.

В третьи сутки осеннего эксперимента (Рис. 17) наблюдалось значительное (в 10 раз) увеличение показателей геомагнитной активности. Две геомагнитные бури произошли одна вслед за другой, и вторая буря наложилась на фазу восстановления первой геомагнитной бури. Этому событию будет посвящен отдельный анализ исследования животных в следующих главах данной книги. В данной Главе нас интересовало изменение структуры сезонных связей различных параметров, происходившее в связи с геомагнитным возмущением, т.е. в связи с вариациями Ар – индекса геомагнитной активности.

Структура связей на дендрограмме, относящейся к фазе максимального взмущения и возрастания Ар – индекса, представляется полностью измененной по сравнению с предыдущими днями.

Параметры, характеризующие поддержание активной реакции крови (VHCO_3., VВЕ_., VHCO_3., AВЕ_., VPH, APH) образуют плотный кластер, наиболее удаленный от остальных показателей. В предыдущие дни наиболее удаленный кластер организовывали показатели лизосомной активности (CA, NSA, EА). В данном случае они образуют кластер с тремя показателями внутрижелудочковых давлений (VPMAXRV, VPREALRV, VPREALLV).

Остальные показатели образуют ветьв кластера, состоящего из трех подветвей:

Первое объединение образует кластер показателей AVPO₂ и APO₂. Второй кластер подветви состоит из показателей парциального давления углекислого газа в крови (VPCO₂, APCO_2.), пульсового давления PP и показателей артериального давления (ADMAX_., АDMIN_.). Третий кластер состоит из показателя геомагнитной активности Aр и показателя VPMAXLV, к которым присоединились показатели гемоглобина в венозной и артериальной крови (VHB, AHB_.) и показатель кислорода в венозной крови VPO₂.

4.5. Обсуждение и выводы

При изучении дендрограмм кластерного анализа за разные сезоны года становится очевидной сезонная перестройка структуры взаимодействия различных функциональных систем организма, как на внутрисистемном, так и на межсистемном уровне. Можно выделить некоторые общие черты, которые определяют характер поведения и взаимодействия функциональных систем в различные сезоны. В целом, наблюдается сходство выявленных отдельных кластерных структур исследованных функциональных связей.

Однако, при детальном анализе видны некоторые различия, относящиеся отдельно к зимне-летнему и весенне-осеннему сезонам. Это касается в первую очередь показателей КОС и газового состава крови. Так кластер показателей VPCO₂-APCO₂ в весенний сезон присоединяется к кластерной структуре VHCO_3., VВЕ, AHCO_3., AВЕ_., VPH, APH. Аналогичная кластерная структура наблюдается и в осенний сезон.

В летний и зимний сезоны кластер показателей VPCO₂ -APCO₂ существенно удален от кластера, содержащего показатели VHCO_3., VВЕ, AHCO₃, AВЕ, VPH, APH. Этот факт можно трактовать с позиций перестройки в эти сезоны взаимодействия функциональных систем, отвечающих за рН крови и оптимальные для метаболизма величины дыхательных показателей. По всей очевидности, дыхательные механизмы регуляции рН, поддерживающие концентрацию бикарбоната в плазме крови, в весенний и осенний сезоны более активны, чем в летний и зимний сезоны.

Имеются и некоторые сходства в структуре показателей, характеризующих деятельность сердечно-сосудистой системы. Летом и зимой показатели внутрижелудочкового давления (VP) образуют симметричную кластерную структуру, в которой показатели правого (RV) и левого (LV) желудочков объединены попарно. В весенний и осенний периоды показатель максимального давления в левом желудочке сердца VPMAXLV группируется с показателями артериального давления. Следовательно, весной и осенью состояние сосудистого тонуса оказывает существенно большее влияние на функцию сердца, чем в другие сезоны.

Отдельный интерес представляет анализ эффектов повышенной геомагнитной активности, относящейся к периоду осени 1984 года. Оказалось, что показатель геомагнитной активности в 70% случаев образует наиболее тесную связь с показателем напряжения кислорода в венозной крови VPO_2., что говорит о существенном влиянии геомагнитной активности на потребление кислорода в тканях. Помимо этого, из анализа суточных дендрограмм в осенний сезон, когда наблюдалось резкое повышение уровня геомагнитной активности, следует, что вышеуказанные показатели группировались в один кластер с показателями уровня гемоглобина. Геомагнитная активность в среднем была достаточно высокой не только в осенний сезон 1984 года, но и в зимний сезон, что отличает эти сезоны от весенне-летнего сезонов. Оказалось, что осенью и зимой при повышенной геомагнитной активности к указанным для этих периодов выше показателям КОС присоединялись показатели кислорода в артериальной крови и артериовенозная разница по кислороду. Этот факт свидетельствует, по-видимому, об активном влиянии геомагнитной активности на систему транспорта кислорода в крови.

При анализе суточных дендрограмм в осенний период, характеризующийся высокой геомагнитной активностью, представляет интерес проследить последовательность образования кластеров вокруг показателя геомагнитной активности. Эта последовательность до дистанции связи, не превышающей значения 1.5, представлена в Таблице 7.

Таблица 7.

Последовательность объединения кластеров, включающих показатель АР, на суточных дендрограммах в осенний период.

На основе данных Таблицы 7 можно сделать вывод, что увеличение абсолютных значений геомагнитной активности (Ар) проявляется в воздействии на сократительную функцию сердца.

Следует отметить также появление связи со всеми показателями лизосомной активности печени в период роста значений геомагнитной активности 22.09. Этот факт может свидетельствовать о перестройке характера адаптации организма к внешнему воздействию с использованием лизосомной системы. Этот результат подтверждает результаты, полученные ранее в работах В.А. Фролова с соавт. (1973, 1995) на основе линейного статистического анализа ультраструктуры гепатоцитов и кардиомиоцитов.

В заключение этой Главы хотелось бы снова подчеркнуть, что несмотря на неправомерность методов корреляции Пирсона, опирающихся на гипотезу о нормальности распределения параметров, использованных в книге Чибисова С.М., Овчинниковой Л.К. и Бреус Т.К., (1998), выводы этой работы остаются в основном справледливыми при проверке критериями, свободными от распределения, например, критерием Краскела - Уоллиса. Применение кластерного анализа, использующего в качестве меры близости элементов кластера ранговую корреляцию Спирмена, свободную от распределения, позволяет дополнительно выявить детали взаимодействия элементов системы, описанные в выводах данной Главы.

ГЛАВА 5

СУТОЧНО-СЕЗОННЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ

УЛЬТРАСТРУКТУРЫ МИОКАРДА НА ПРИМЕРЕ ЭКСПЕРИМЕНТОВ С ЖИВОТНЫМИ

Сезонные изменения хроноструктуры ритмов сердца должны сопровождаться изменениями ультраструктуры миокарда, которые предполагалось исследовать в наших лабораторных экспериментах с животными. В результате анализа трансмиссионных электронограмм, полученных в различные сезоны и часы суток были выявлены следующие ультраструктурные особенности миокарда.

5.5.Весенний сезон

Анализ результатов исследования ультраструктуры кардиомиоцитов интактных животных в различное время суток весеннего сезона показывает, что состояние сердечных клеток имеет суточную динамику. В утреннее время (6 часов) выражены явления гиперфункции ультраструктур кардиомиоцитов.

В целом для ультраструктуры сердца в это время весеннего сезона характерна следующая картина. Клеточная мембрана разрыхлена. Наружный листок мембраны имеет участки разрушения. Отмечаются явления умеренного внутри- и внеклеточного отека. В цитоплазме имеется большое количество первичных и вторичных лизосом (рис.18). Лизосомы часто заполнены каплями липофусцина и рас-

Рис. 18 Электронограмма миокарда левого желудочка сердца интактного кролика в весенний сезон. Характерно наличие большого количества первичных и вторичных лизосом, располагающихся скоплениями. (Ув.20.000х)

полагаются скоплениями. Очень много исчерченных и гомогенных липидных включений. Некоторые исчерченные липиды представляют по форме “снимок” с прилежащей митохондрии.

Имеются клеточные ядра различной формы с сохранной ядерной оболочкой. Встречаются фрагментированные ядра и ядра с инвагинированной мембраной. Хроматин, как правило, распределен по всей нуклеоплазме, но отмечаются также явления его маргинации.

Рис.19 Электронограмма миокарда левого желудочка сердца интактного кролика в весенний сезон. Канальцы саркоплазматического ретикулума расширены. Часто встречаются гранулярные формы СПР. Ув.20.000х

В капиллярах наблюдается умеренный пиноцитоз. Стенки капилляров в большинстве кардиомиоцитов окружены коллагеновыми муфтами. Встречается коллаген и между миофибриллами. Основная часть канальцев СПР резко расширена. Часто встречаются гранулярные формы СПР (рис.19).

Миофибриллы слегка отечны, местами разволокнены. Есть участки разрывов и пересокращения. Митохондрии полиморфны и распределены неравномерно. Количество митохондрий несколько выше, чем в другие сезоны. Площадь митохондрий меньше, чем среднегодовая, а суммарное количество крист в них больше.

Количественный анализ состояния митохондриального аппарата показал, что количество органелл, их площадь и состояние крист изменяется в течение суток. Наибольшее количество митохондрий отмечено в 12 часов, а наименьшее - в 6 часов. В 6 часов происходит выраженное набухание митохондрий, о чем свидетельствует увеличение их площади. В это же время отмечено уменьшение крист.

В ночное и утреннее время (0, 3, 6, 9 часов) повышение сократительной функции левого желудочка сопровождается набуханием митохондрий и их крист, вследствие чего уменьшается количество последних (коэффициент корреляции между VPREALRV и количеством крист равен - 0,941).

Регрессионный анализ суточных колебаний сократительной силы сердца показал, что функциональная активность сердца достоверно возрастает в период около 6 часов. Обеспечение энергозатрат кардиомиоцитов на повышение сократительной силы сердца, очевидно, происходит за счет увеличения площади митохондрий, т.е. их набухания. Возрастание объема органелл сопровождается разрывом наружной мембраны, что приводит к уменьшению общего числа функционирующих митохондрий, и при воздействии дополнительной нагрузки на миокард в это время суток может отрицательно сказаться на энергообразовании в кардиомиоцитах.

О высокой сократительной активности сердца в это время суток свидетельствуют также ультраструктурные изменения в миоцитах. Клеточное ядро имеет 2-3 ядрышка, мембрана его инвагинирована, в нуклеоплазме - маргинация хроматина. Резко расширен СПР, который местами имеет гранулярную форму. Очень много первичных и вторичных лизосом, расположенных в околоядерной зоне и окружающих СПР. Встречаются участки разрушения миофибрилл. Гликоген и липидные включения, расходуемые на обеспечение высокой сократительной силы, находятся в клетке в небольшом количестве.

Заключая раздел, можно отметить, что время перехода к локомоторной активности неблагоприятно для активной физической нагрузки и действия повреждающих факторов.

5.5. Летний сезон

Исследование морфологии кардиомиоцитов в летний сезон показало, что состояние ультраструктуры в течение суток изменяется незначительно. Наиболее выраженные отличия имеются в 6 часов утра, когда можно говорить о гиперфункции ультраструктуры кардиомиоцитов и энергообразующего аппарата клетки.

В целом для летнего сезона характерны следующие закономерности. Клеточная мембрана местами разрыхлена и теряет двухконтурность. Отмечаются явления умеренно выраженного межклеточного отека. Клеточные ядра содержат небольшое количество хроматина, который, в основном, имеет краевое расположение. Нуклеолемма двухконтурна. Часто в ядрах имеется 2-3 ядрышка. Мембрана ядер инвагинирована.

Капилляры во многих случаях окружены коллагеновыми муфтами. В миоцитах много лизосом различных типов. Канальцы СПР умеренно расширены. Миофибриллы без особенностей (рис.20). В отдельных миофибриллах отмечаются участки гомогенизации.

Рис.20 Электронограмма миокарда левого желудочка сердца интактного кролика в летний сезон. Миофибриллы без особенностей. Митохондрии в состоянии умеренного набухания. Ув.20.000 х

Количество митохондрий по сравнению с весной уменьшено, а площадь их увеличена. Ярко выражен полиморфизм митохондрий. Часто встречаются вакуоли с большим количеством мелких митохондрий. Для митохондрий характерно состояние умеренного набухания. Отмечаются явления гомогенизации и вакуолизации матрикса. Наиболее существенно в течение суток меняется количество исчерченных липидных включений и цитогранул гликогена.

В период с 3 до 12 часов между коэффициентом энергетической активности митохондрий и показателем сократительной силы сердца отмечается сильная достоверная отрицательная корреляционная связь (коэффициент корреляции равен -0,963). Эта же пара показателей связана между собой более сильно в период с 3 до 9 часов (коэффициент корреляции равен -1,0).

Повышению сократительной силы левого желудочка в раннее утреннее время летнего сезона сопутствуют изменения ультраструктуры миокарда и его энергообразующего аппарата. Механизм изменений однотипен описанному для весеннего сезона.

5.3. Осенний сезон

В результате исследования состояния ультраструктур сердца животных осенней группы можно заключить, что оно имеет суточную динамику с явлениями гиперфункции ультраструктур в вечернее время. В целом для осеннего сезона характерны следующие закономерности.

Наружный листок клеточной мембраны местами разрушен. Во многих случаях сарколемма образует аркады - пальцевидные выпячивания, в которых находится большое количество мелких митохондрий. Отмечаются явления умеренного вне- и внутриклеточного отека.

Количество цитогранул гликогена по сравнению с летом уменьшено. В цитоплазме часто встречаются исчерченные липидные включения. В кардиомиоцитах отмечается значительное количество лизосом с преобладанием первичных форм.

Клеточные ядра насыщены хроматином, который равномерно распределен по всей нуклеоплазме и лишь иногда образует узкую полоску по краю нуклеоплазмы.

Коллагеновые муфты вокруг капилляров встречаются реже, чем летом и весной. Канальцы СПР без особенностей.

Миофибриллы, в основном, без особенностей, но в период гиперфункционирования сердца в миофибриллах наблюдаются очаги гомогенизации. Вставочные диски утолщены, имеют расширенные щели. Миофибриллы отечны, волокнисты, с очагами лизиса и разрывов. Количество митохондрий по сравнению с летом не увеличено. Площадь органелл существенно больше, а количество крист в них уменьшено (рис.21). В основном для митохондрий характерны разные степени набухания. Наружная мембрана часто или размыта, или имеет участки разрушения. Встречаются деградирующие митохондрии с полностью разрушенной мембраной или вакуолизированные формы.

Рис.21. Электронограмма миокарда левого желудочка сердца интактного кролика в осенний сезон. Набухание митохондрий, уменьшение в них количества крист. Полиморфизм митохондрий. Ув.20.000 х

Наибольшие суточные изменения претерпевает состояние энергообразующего комплекса.

В период с 9 до 18 часов между коэффициентом энергетической эффективности митохондрий и показателем сократительной силы сердца (ВД_мЛЖ) отмечается сильная достоверная положительная связь (коэффициент корреляции +0,976).

Необходимо отметить однонаправленность суточных изменений коэффициента энергетической эффективности митохондрий в осенний и весенний сезоны (коэффициент корреляции +0,777), причем в ночное и утреннее время эта связь увеличивалась до +0,986.

5.5. Зимний сезон

В результате проведенных исследований ультраструктуры миокарда в зимний сезон можно отметить, что имеется суточная динамика изменений состояния кардиомиоцитов. Гиперфункционирование ультраструктур выражено в период вечернего пика сократительной силы сердца. В ночное и утреннее время морфологическое состояние миокарда не отличается резкими изменениями.

В целом для ультраструктуры миокарда в зимний сезон характерна следующая картина. Клеточная мембрана - без каких-либо особых изменений. Ядра содержат небольшое количество хроматина, расположенного, в основном, маргинально. Наблюдаются явления фрагментации ядер.

Капилляры умеренно расширены. В подавляющем большинстве электронограмм наблюдаются сосуды, окруженные коллагеновыми муфтами. Это явление более выражено в период с 6 до 12 часов и наименее - с 15 до 21 часа.

Лизосомы присутствуют в очень больших количествах. Их число гораздо больше, чем в любой другой сезон года. Размеры органелл сильно варьируют от 0,03 до 0,6 мкм². Часто встречаются лизосомы, матрикс которых полностью замещен каплями липофусцина (рис.22). В период с 3 до 18 часов число лизосом наибольшее, а с 21 до 3 часов - наименьшее. Канальцы умеренно расширены.

Присутствие цитогранул гликогена значительно изменяется в течение суток. Наибольшее количество гликогена наблюдается в 0 - 3 часа, наименьшее - в 6 и 18 часов. Цитогранулы гликогена распределены гетерогенно: в некоторых клетках отмечаются их массивные скопления, в то время как в других клетках они отсутствуют. В целом, гранул гликогена в клетках меньше зимой, чем в другие сезоны.

Значительные суточные колебания отмечены в количестве гомогенных и исчерченных липидных включений, хотя в целом для зимнего сезона характерно очень большое их число (рис.21). Наибольшее их количество наблюдается в 12 и 18 часов, а в 3 и 15 часов они отсутствуют.

Рис.22 Электронограмма миокарда левого желудочка сердца интактного кролика в зимний сезон. Большое количество лизосом, образующих вакуоли с разрушенными митохондриями с образованием капель липофусцина. Ув. 20.000 х

Миофибриллы, в основном, имеют обычное строение с несколько утолщенными вставочными дисками.

Основная масса митохондрий имеет четко двухконтурную мембрану и параллельно расположенные, “грубо упакованные” кристы. Митохондрии имеют различные размеры от 0,1 до 3,5 мкм². Количество митохондрий зимой больше, чем летом и осенью, но меньше, чем весной.

Рис.23 Электронограмма миокарда левого желудочка сердца интактного кролика в зимний сезон. Большое количество липидных включений. Набухание митохондрий, гомогенизация их матрикса. Ув.20.000 х

Состояние энергообразующего аппарата резко изменяется в период вечернего пика сократительной силы миокарда. Митохондрии имеют значительные участки разрушения наружного листка мембраны. Встречаются митохондрии с тотально разрыхленной наружной мембраной или с ее остатками. Значительная часть митохондрий имеет фрагментированные или разрушенные кристы. Площадь всех митохондрий увеличена. Матрикс многих органелл вакуолизирован.

Гиперфункционированию митохондрий сопутствуют изменения ультраструктуры всей клетки. Увеличивается площадь ядер за счет образования множественных выпячиваний. Хроматин располагается по периферии ядер. Имеются очаги его вымывания.

Развивается фрагментация миофибрилл с явлениями расплавления саркомеров.

Из цитоплазмы практически исчезают цитогранулы гликогена. В клетке появляется огромное количество липидных включений. Часть из них окружена венчиком лизосомных гидролаз, часть, в виде капель липофусцина входит в состав вторичных лизосом, количество которых в это время года также значительно увеличено.

Зимой в ночное и утреннее время сократительная сила миокарда зависит от суммарного количества крист в митохондриях. При набухании крист увеличивается сократительная сила сердца (коэффициент корреляции равен -0,979).

Интересно, что зимой и летом динамика суточных изменений суммарного количества крист в электронограммах однонаправленна (коэффициент корреляции +0,7 при р<0,05). Связь этих двух показателей возрастает в период с 0 до 9 часов (коэффициент корреляции +0,967).

5.6. Заключение

Заключая рассмотренный морфологический раздел, следует отметить следующие особенности.

Состояние ультраструктуры миокарда изменяется в течение года. Направленность изменений различна для разных структур клетки. Эти отличия имеют скорее количественный, чем качественный характер.

В весенний период в подавляющем большинстве электронограмм наблюдаются сосуды, окруженные коллагеновыми муфтами (рис.24), особенно с 6 до 12 часов. Зимой и особенно весной отмечены выраженные изменения СПР с явлениями его резкого расширения и наличием гранулярных форм. В этот период регистрируется наибольшее количество лизосом различных форм, особенно часто встречаются вторичные лизосомы, заполненные каплями липофусцина.

Зимой в кардиомиоцитах содержится огромное количество исчерченных и гомогенных липидных включений. Некоторые исчерченные липиды представляют по своей форме “снимок” с прилегающих митохондрий, что свидетельствует об их происхождении. В зимний период в клетках миокарда значительно меньше цитогранул гликогена, чем в другое время.

Рис.24 Электронограмма миокарда левого желудочка сердца интактного кролика в весенний период года. Характерно наличие коллагеновых масс вокруг сосудов и между миофибриллами. Ув.20.000 х

Состояние митохондриального аппарата также имеет сезонные отличия. Наибольшее количество митохондрий наблюдается весной и зимой. В эти сезоны митохондрии более сохранны, чем осенью и летом. Для летне-осеннего периода характерно набухание митохондрий разной степени. Наружная мембрана органелл часто или размыта, или имеет участки разрушения. Часто встречаются митохондрии с явлениями гомогенизации или вакуолизации матрикса, деградирующие митохондрии с полностью разрушенной мембраной.

Следует подчеркнуть, что акрофаза сократительной силы сердца сопровождается однотипной реакцией ультраструктуры клетки вне зависимости от сезона и выражается следующим образом. Обеспечение сократительного акта высокой силы происходит за счет возрастания объема митохондрий, сопровождающегося разрывом наружной мембраны у части органелл, что приводит к уменьшению общего числа функционирующих митохондрий.

В это же время отмечается гиперфункция ультраструктуры клетки. Клеточное ядро имеет 2-3 ядрышка, мембрана его инвагинирована, в нуклеоплазме маргинация хроматина. Очень резко расширен СПР, во многих случаях отмечаются его гранулярные формы. Очень много первичных и вторичных лизосом, расположенных в околоядерной зоне или окружающих СПР. Встречаются участки разрывов миофибрилл.

Гранулы гликогена и липидные включения, расходуемые на обеспечение высокой сократительной силы, находятся в клетке в небольшом количестве за исключением зимнего сезона, когда кардиомиоцит как бы “нашпигован” огромным количеством липидов. Часть из них окружена венчиком лизосомных гидролаз, часть, в виде капель липофусцина входит в состав вторичных лизосом, количество которых в этот сезон самое большое.

Резюмируя результаты этого раздела, можно отметить, что в период гиперфункционирования ультраструктур кардиомиоцитов воздействие дополнительной нагрузки или действие стресс-фактора может неблагоприятно отразиться на морфофункциональном состоянии сердца.

Для разных сезонов неблагоприятные для нагрузки часы отличаются. Весной имеется один максимально выраженный пик морфофункциональной гиперфункции - это раннее утреннее время, когда осуществляется переход к активной локомоторной деятельности. Летом - это также утреннее время, но в этот сезон параметры деятельности сердца в течение суток мало изменяются, и действие стресс-фактора не приведет к значительным повреждениям. Осенью гиперфункция отмечена в вечернее время, а зимой - и в утреннее, и в вечернее время.

ГЛАВА 6

ИЗМЕНЕНИЕ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ СЕРДЦА ПРИ МОДЕЛИРОВАННОМ ДЕСИНХРОНОЗЕ

В этой главе изложены результаты исследований по экспериментальному моделированию десинхроноза у животных. Задачей исследований было воздействие на организм животных известным стресс-фактором и исследование морфофункциональных последствий этого воздействия на фоне суточной динамики показателей, в частности, в утреннее и вечернее время, когда морфофункциональное состояние сердца (Глава 5) имеет наибольшие отличия от среднесуточных характеристик.

В качестве десинхронизирующего воздействия использовалась алкоголизация животных. Известно, что алкогольная интоксикация вызывает в организме развитие стресс-реакции (В.П.Латенков, 1987). Одним из основных патофизиологических эффектов алкоголя на клеточном уровне является его мембранотропное (мембранотоксическое) действие, развивающееся вследствие включения этанола в состав мембранных структур клеток (А.Е.Успенский, 1984). Этанол нарушает структуру и функцию митохондрий и эндоплазматического ретикулума (J.M.Lit-tleton, 1980; В.С.Пауков с соавт., 1996).

Выбор данного подхода к созданию экспериментальной модели десинхроноза обоснован также практическим отсутствием исследований по морфологическим и хронотоксическим аспектам влияния алкоголя на сердечно-сосудистую систему, общие аспекты которого обсуждались нами в Главе 1 (раздел 1.3.1).

Таким образом, главной задачей этого этапа исследований являлось изучение стресс-реакции на морфофункциональное состояние сердца в различные фазы его сезонно-суточных ритмов.

Наши исследования показали, что моделирование стресс-реакции на внешнее биотропное воздействия (в данном случае, алкоголизация животных) имеет слабую зависимость от сезонов, однако существенно зависит от времени воздействия. Во все сезоны года модельная стресс-реакция выражается в падении сократительной силы сердца, если модельное стресс-воздействие производится в начале фазы локомоторной активности животных, т.е. утром, и можно заметить, что выраженность этого процесса в осенне-зимний период года превосходит её в другие сезоны. В частности, осенью в группе животных, которым вводился алкоголь утром, произошло падение сократительной функции сердца по показателю реального давления в полости левого желудочка на 46%, правого желудочка - на 32%, по показателю максимального давления - на 17% и 30% соответственно. При проведении экспериментов в утреннее время зимнего периода к 11-му дню воздействия на животных алкоголем отмечены случаи гибели среди опытных животных.

При алкоголизации животных в вечернее время происходило незначительное падение сократительной силы сердца, а в некоторых случаях имелась даже тенденция к ее повышению.

Таблица 8

Поиск по сайту: