НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ СОЕДИНЕНИЙ МЕТОДОМ ДИАЛИЗА

Диализом называется процесс разделения высокомолекулярных и низкомолекулярных веществ с помощью полупроницаемых мембран.

Диализ широко используется для очистки белков от примесей низкомолекулярных соединений (соли, сахара и др.), которые легко проходят через поры полупроницаемых мембран. Белковые молекулы, обладая большим молекулярным весом, не способны проникать через искусственные или естественные мембраны (коллодий, пергамент, целлофан и другие).

Прибор, в котором проводят диализ, называется диализатором. Простейший диализатор представляет собой мешочек из полупроницаемого материала, в который заливается диализируемая жидкость. Мешочек опускается в сосуд с водой. Белок, помещенный в мешочек, остается в нем, а низкомолекулярные вещества в результате процесса диффузии проходят через мембрану во внешний раствор. Необходимый градиент концентрации поддерживают путем смены воды во внешнем сосуде.

Диализ можно ускорить более частой или непрерывной сменой воды, нагреванием (для растворов белков не выше 40⁰С), увеличением поверхности, через которую идет диализ, уменьшением слоя диализируемой жидкости.

Реактивы и оборудование: раствор яичного белка, насыщенный сульфатом аммония, 1%-ный раствор хлорида бария, 10%-ный раствор гидроксида натрия, 1%-ный раствор сульфата меди, пробирки: обыкновенные и мерная, химический стакан, целлофановый мешочек, штативы.

Приготовление раствора белка: белок одного куриного яйца отделить от желтка, смешать с 300 мл дистиллированной воды и 100 мл насыщенного раствора сульфата аммония и отфильтровать через марлю, сложенную в 3 слоя.

Выполнение работы. В простейший диализатор с помощью воронки вливают 10 мл раствора яичного белка. Целлофановый мешочек погружают в стакан с дистиллированной водой так, чтобы уровень жидкости в мешочке совпадал с уровнем воды во внешнем сосуде. Через каждые 10-15 минут меняют и анализируют воду из внешнего сосуда: в одной пробирке проводят биуретовую реакцию и убеждаются в том, что белки через мембрану не проходят, в другой пробирке проводят реакцию на ион SO₄^2- для установления проникновения соли через поры мембраны. Для этого к 1 мл анализируемого раствора добавляют 6-10 капель 1%-ного раствора хлорида бария. Если диализ проводился правильно, то должен выпадать белый мутноватый осадок BaSO₄.

Через 2 часа проба на сульфат-ионы становится отрицательной или очень слабой. Это свидетельствует о завершении диализа, т.е. о почти полной диффузии соли через целлофановую мембрану. В мешочке к этому времени прозрачный фильтрат мутнеет, вследствие выпадения в осадок глобулинов, нерастворимых в дистиллированной воде.

Контрольные вопросы.

1. Что называется диализом?

2. От каких факторов зависит скорость диализа? Как ее можно увеличить?

3. На чем основано отделение высокомолекулярных веществ от низкомолекулярных методом диализа?

4. Для чего используется диализ? В чем его достоинства и недостатки?

Поиск по сайту: