Теоретическая справка. Широкое применение находит твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА)

Широкое применение находит твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА). Он основан на том, что белки прочно адсорбируются на пластинках, например из поливинилхлорида. Один из наиболее распространенных на практике вариантов ИФА основан на использовании меченных ферментом специфических антител той же специфичности. К носителю с иммобилизованными антителами добавляют раствор с анализируемым антигеном. В процессе инкубации на твердой фазе образуются специфические комплексы антиген-антитело. Затем носитель отмывают от не связавшихся компонентов и добавляют гомологичные антитела, меченные ферментом, которые связываются со свободными валентностями антигена в составе комплексов. После вторичной инкубации и удаления избытка этих меченных ферментом антител определяют ферментативную активность на носителе, величина которой будет пропорциональна начальной концентрации исследуемого антигена.

При другом варианте ИФА к иммобилизованному антигену добавляют исследуемую сыворотку. После инкубации и удаления не связавшихся компонентов с помощью меченных ферментом антиглобулиновых антител выявляют специфические иммунокомплексы. Данная схема является одной из наиболее распространенных в ИФА.

СХЕМА №5

*

+

Специфические Исследуемый материал- Специфические антитела Субстрат

антитела возбудитель с пероксидазой для пероксидазы

СХЕМА №6

*

+

Исследуемая АГС

сыворотка Субстрат для

Специфический пероксидазы

антиген

Контроль:

позитивный - иммунная сыворотка, меченная пероксидазой + субстрат - 2 лунки;

негативный - нормальная сыворотка + субстрат - 2 лунки.

Цель:

Разобрать механизм прямого (1) и непрямого (2) метода ИФА (см схему № 5, 6; теоретическую справку). Указать практическую значимость

1.

«О» «КН» «КП»

Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2.

1/14 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 «КН» «КП»

Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Выполните задания для самоконтроля:

Иммуноферментный анализ основан на______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Ингредиенты для постановки ИФА:

1.___________________________________________________________________________

2.___________________________________________________________________________

3.___________________________________________________________________________

4.___________________________________________________________________________

Феномен реакции_____________________________________________________________

Поиск по сайту: