Прямой и косвенный методы определения санитарно-эпидемиологического состояния объектов внешней среды. Достоинства и недостатки

Санитарная микробиология. Определение, задачи. Объекты санитарно-микробиологического исследования. Связь санитарной микробиологии с инфекционной микробиологией, гигиеной, эпидемиологией.

Санитарная микробиология – наука, изучающая микрофлору окружающей среды и вызываемые ею процессы, которые могут оказать влияние на здоровье человека.

Санитарная микробиология – отдельное направление медицинской микробиологии, изучает те же объекты, но подходы к их исследованию – другие.

n Это одна из основных гигиенических дисциплин.

n У санитарной микробиологии очень тесные связи с эпидемиологией, т.к. СМ дает эпидемиологическую оценку объекта, его опасность.

Задачи СМ:

ü раннее обнаружение патогенной микрофлоры во внешней среде;

ü разработка и оценка микробиологических методов исследования объектов окружающей среды;

ü разработка микробиологических нормативов, характеризующих гигиеническое состояние объектов окружающей среды, их эпидемиологическую опасность и пригодность для использования человеком.

ü Оценка путей воздействия человека и животных на окружающую среду.

· Рост крупных городов (урбанизация) и развитие промышленности ведет к загрязнению окружающей среды, ухудшению условий существования живой природы. Возрастает загрязненность окружающей среды микроорганизмами, в т. ч. патогенными и в то же время уменьшается возможность естественного самоочищения и обеззараживания окружающей среды.

ü Разработка рекомендаций по микробиологическим аспектам оздоровления объектов среды, и контроль за эффективностью проводимых мероприятий.

Отличия СМ от клинической (диагностической) микробиологии:

n Разрабатывает высокочувствительные методы индикации патогенных микроорганизмов во внешней среде.

n Применяет специфические методы обогащения, селективные среды, другие методы физического и химического обогащения.

n Важная роль отводится экспресс-методам (ИФА, РИА, ПЦР).

n СМ часто использует косвенные методы определения загрязненности внешней среды микроорганизмами, по обнаружению т.н. санитарно-показательных микроорганизмов.

n Часто сочетает качественные и количественные показатели, это позволяет оценить массивность загрязнения того или иного объекта.

Цели и этапы санитарно-микробиологического исследования. Плановый санитарно-микробиологический контроль и обследований по эпидемиологическим показаниям. Нормативно-методические документы.

Цель санитарно-микробиологического исследования:

1. Обнаружение санитарно-показательных или патогенных микроорганизмов в определенном объеме или массы исследуемого материала

2. Определение количества обнаруженных микроорганизмов в единице объема или массы исследуемого материала

Этапы санитарно-микробиологического исследования:

1. Забор образца для исследования

2. Подготовка образца (гомогенизация, десорбция)

3. Приготовление разведений исследуемого образца

4. Выращивание микроорганизмов на питательных средах после посева приготовленных разведений

5. Идентификация выделенных микроорганизмов и их количественный учет

6. Заключение

Нормативно-методические документы: санитарные правила и нормы - СанПиН, Государственный отраслевой стандарт — ГОСТ, Методические указания — МУ, Методические указания по методам контроля — МУК, инструкции.

3. Принципы и методы санитарной микробиологии. Этапы и варианты бактериологического метода количественного определения микроорганизмов в объектах внешней среды.

Принципы санитарно-микробиологических исследований

n На результаты анализов могут существенно повлиять различные факторы.

Поэтому при проведении санитарно-микробиологических исследований следует помнить о следующих основных принципах.

1. Правильный забор проб.

ü Его проводят с соблюдением всех необходимых условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта.

ü Забор проб проводят с соблюдением правил стерильности; при транспортировке следует создать оптимальные условия, позволяющие избежать искажения результатов.

ü Исследования необходимо проводить быстро; при невозможности немедленного проведения анализа материал сохраняют в холодильнике не дольше 6-8 ч.

2. Серийность проводимых анализов.

ü Большинство исследуемых объектов содержит самые разнообразные микроорганизмы, распределённые крайне неравномерно и пребывающие в антагонистических взаимоотношениях. Соответственно для получения адекватных результатов проводят забор серии проб из разных участков объекта. В лаборатории образцы, смешивают, затем точно отмеряют необходимое количество материала (обычно среднее по отношению к исследуемому материалу в целом).

3. Повторность отбора проб.

ü Как правило, в исследуемых объектах состав микрофлоры меняется достаточно быстро и патогенные микроорганизмы распределяются в них неравномерно.

ü Повторный отбор проб позволяет получить более адекватную информацию по контаминации объектов.

4.Применение только стандартных и унифицированных методов исследования.

ü Использование подходов, утверждённых ГОСТ и инструкциями

ü Это даёт возможность получать сравнимые результаты в различных лабораториях.

5. Использование комплекса тестов.

ü Получение более адекватной информации возможно при привлечении прямых (выявляющих возбудителей) и косвенных (указывающих на загрязнение объектов окружающей среды выделениями человека и животных и его степени) методов.

6. Проведение оценки объектов по совокупности полученных результатов.

ü Интерпретацию результатов санитарно-микробиологических исследований следует проводить с учётом других гигиенических показателей (органолептических, химических, физических и т.д.).

Методы санитарной микробиологии:

1) Микроскопический

2) Культуральный (основной)

Этапы и варианты бактериологического метода:

Этапы бактериологического метода:

1.Забор образца для исследования

2.Подготовка образца (гомогенизация, десорбция)

3.Приготовление разведений исследуемого образца

4.Выращивание микроорганизмов на питательных средах после посева приготовленных разведений

5.Идентификация выделенных микроорганизмов и их количественный учет

6.Заключение

Методы культивирования микроорганизмов (глубинный метод посева в плотные среды, поверхностный метод посева на плотные среды метод мембранных фильтров, метод посева на жидкие среды)

Глубинный метод посева в плотные среды. Жидкий продукт или разведение навески вносят параллельно в две чашки Петри и заливают не позднее чем через 15 мин расплавленной и охлажденной до температуры 45±0,5ºС питательной средой. Высота слоя питательной среды должна быть 4—5 мм.

Среду немедленно равномерно перемешивают с посевным материалом круговыми движениями чашки так, чтобы среда не вытекла из чашки и не загрязнила крышку. После застывания среды чашки с посевами вверх дном помещают в термостат.

Поверхностный метод посева на плотные среды. Среду наливают в чашку Петри и после застывания подсушивают. Для удаления влаги с поверхности среды чашки открывают, переворачивают вверх дном и выдерживают в течение 30 мин при 48-50ºС.

На подсушенную среду наносят жидкий продукт или разведение навески и равномерно растирают по поверхности шпателем — изогнутой стеклянной палочкой.

Засеянную поверхность подсушивают, выдерживая чашки в горизонтальном положении в течение 15 мин.

Метод посева в жидкие среды. Вколбу или пробирки с питательной средой вносят навеску продукта или разведения навески. При определении количества микроорганизмов питательные среды засевают продуктом и(или) разведениями навесок так, чтобы последовательно выдерживалась заданная кратность количества посевного материала.

Метод мембранных фильтров. Мембранные фильтры применяют для анализа легко фильтруемых жидких продуктов или продуктов, дающих растворы с высоким осмотическим давлением. При фильтрации раствора с высоким осмотическим давлением раствор предварительно разводят дистиллированной или пептонной водой в соотношении, позволяющем легко профильтровать разведенные растворы.

Жидкий продукт, содержащий небольшое число взвешенных частиц, фильтруют в два этапа. Для освобождения от частиц его фильтруют через фильтр со средним диаметром пор 4 мкм, а затем — через фильтр, диаметр и размеры пор которого выбраны в соответствии с группой или видом выявляемых микроорганизмов. Оба фильтра культивируют в аналогичных условиях.

После осаждения микроорганизмов на фильтре из растворов с высоким осмотическим давлением или из растворов, содержащих антимикробные вещества, его промывают дистиллированной водой или пептонно-солевым раствором.

Фильтрацию заканчивают в момент исчезновения влаги на поверхности фильтра. Немедленно после окончания фильтрации фильтр переносят на плотные или в жидкие питательные среды. На плотную среду фильтр накладывают нижней стороной так, чтобы она полностью соприкасалась с поверхностью среды. Посевы термостатируют в условиях, благоприятных для роста определяемых микроорганизмов.

Прямой и косвенный методы определения санитарно-эпидемиологического состояния объектов внешней среды. Достоинства и недостатки.

Практическая санитарная микробиология использует 2 основных метода оценки санитарно-эпидемического состояния внешней среды.

1. Методы прямого обнаружения возбудителя

ü Являются наиболее точными и надёжными критериями оценки эпидемиологической опасности внешней среды.

ü Основной недостаток методов — низкая чувствительность.

Посев на питательные среды.

Трудность выделения патогенных микроорганизмов обусловливают следующиефакторы:

ü 1. Сравнительно низкое содержание патогенных микроорганизмов во внешней среде, составляющих лишь 1/30 000 всего видового состава микрофлоры внешней среды. При этом патогенная микрофлора распределена во внешней среде неравномерно, что делает необходимым проведение серийных исследований в динамике определённого периода.

ü 2. Выделение одного возбудителя далеко не всегда свидетельствует о присутствии других видов патогенов. Необходимо проведение разнонаправленных исследований, что сложно осуществимо. Ситуацию значительно усугубляет возрастание роли условно-патогенных микроорганизмов, способных вызвать эпидемические вспышки заболеваний.

ü 3. Определённые проблемы создаёт изменчивость патогенов; последние, попадая во внешнюю среду, часто приобретают новые свойства, затрудняющие их распознавание.

ü 4. На практике выделение возбудителей часто осложняют конкурентные взаимоотношения между патогенами и сапрофитами при совместном выращивании на питательных средах.

ü 5. Трудность выделения возбудителя связана также с недостаточной элективностью питательных сред и необходимостью использовать лабораторных животных и культуры тканей.

2. Методы косвенной индикации возможного присутствия возбудителя во внешней среде

Используют 2 критерия, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии возбудителя во внешней среде:

· общее микробное число (ОМЧ) и

· содержание санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ).

1. ОМЧ определяют путём подсчёта всех микроорганизмов в 1 г или 1 мл субстрата; используя этот критерий, обычно исходят из предположения, что чем больше объект загрязнён органическими веществами, тем выше ОМЧ и тем вероятнее присутствие патогенов. Однако это не всегда так, т.к. ОМЧ может быть большим за счёт сапрофитов, а патогены могут отсутствовать, либо преобладание сапрофитов значительно укорачивает сроки выживания патогенов во внешней среде. Поэтому более адекватно расценивать ОМЧ как показатель интенсивности загрязнения внешней среды органическими веществами.

2. Санитарно-показательными называют микроорганизмы, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов во внешней среде. То есть при их определении исходят из предположения, что чем больше объект загрязнён выделениями человека и животных, тем больше будет санитарно-показательных микроорганизмов и тем вероятнее присутствие патогенов.

Косвенный метод санитарно-микробиологического анализа. Общее микробное число (ОМЧ). Количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (МАФАнМ). Наиболее вероятное число (НВЧ). Характеристика показателей. Методы определения. Интерпретация результатов.

Используют 2 критерия, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии возбудителя во внешней среде:

· общее микробное число (ОМЧ) и

· содержание санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ).

1. ОМЧ определяют путём подсчёта всех микроорганизмов в 1 г или 1 мл субстрата; используя этот критерий, обычно исходят из предположения, что чем больше объект загрязнён органическими веществами, тем выше ОМЧ и тем вероятнее присутствие патогенов. Однако это не всегда так, т.к. ОМЧ может быть большим за счёт сапрофитов, а патогены могут отсутствовать, либо преобладание сапрофитов значительно укорачивает сроки выживания патогенов во внешней среде. Поэтому более адекватно расценивать ОМЧ как показатель интенсивности загрязнения внешней среды органическими веществами.

2. Санитарно-показательными называют микроорганизмы, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов во внешней среде. То есть при их определении исходят из предположения, что чем больше объект загрязнён выделениями человека и животных, тем больше будет санитарно-показательных микроорганизмов и тем вероятнее присутствие патогенов.

Как дополнительный показательв настоящее время также используют индекс наиболее вероятного числа (НВЧ), имеющий доверительные границы, в пределах которых может колебаться истинное количество искомого микроба с 95% вероятностью. Для определения НВЧ исследования проводят 3, 5 и 10 раз; показатель определяют по специальным таблицам Хоскенса-Муре.

Определение МАФАнМ (в масле):

По 1 мл разведений масла (1:100 и 1:1000) в стерильные пустые чашки Петри, расплавленный и остуженный до 45° МПА (15-20 мл). После инкубации посевов разведений масла на чашках Петри при температуре 30° в течение 72 часов считаются колонии только в посевах тех разведений, где выросло от 15 до 300 колоний. Количество микроорганизмов в 1 мл рассчитывается по формуле: К=АВ/С, где К – КОЕ (количество микробов в 1 мл), А – количество колоний на чашке, В – объем масла, в котором хотим определить количество микроорганизмов (1 мл), С – объем посева.

Поиск по сайту: