АвтоАвтоматизацияАрхитектураАстрономияАудитБиологияБухгалтерияВоенное делоГенетикаГеографияГеологияГосударствоДомДругоеЖурналистика и СМИИзобретательствоИностранные языкиИнформатикаИскусствоИсторияКомпьютерыКулинарияКультураЛексикологияЛитератураЛогикаМаркетингМатематикаМашиностроениеМедицинаМенеджментМеталлы и СваркаМеханикаМузыкаНаселениеОбразованиеОхрана безопасности жизниОхрана ТрудаПедагогикаПолитикаПравоПриборостроениеПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРадиоРегилияСвязьСоциологияСпортСтандартизацияСтроительствоТехнологииТорговляТуризмФизикаФизиологияФилософияФинансыХимияХозяйствоЦеннообразованиеЧерчениеЭкологияЭконометрикаЭкономикаЭлектроникаЮриспунденкция

Генетические методы

Читайте также:
  1. I. Иммунология. Определение, задачи, методы. История развитии иммунологии.
  2. I. Методы механического разобщения бактерий.
  3. I. Методы, основанные на изучении фрагментов ДНК.
  4. II. Методы непрямого остеосинтеза.
  5. II. Рыночные методы.
  6. III. Методы искусственной физико-химической детоксикации.
  7. III. Методы, основанные на амплификации нуклеиновых кислот.
  8. III. Параметрические методы.
  9. IV. МЕТОДЫ ЭКОНОМИЧЕСКОЙ ТЕОРИИ, ЭКОНОМИЧЕСКИЕ ЗАКОНЫ И КАТЕГОРИИ
  10. IV. Современные методы синтеза неорганических материалов с заданной структурой
  11. V2: История предмета и методы микроэкономики.
  12. VI. Методы, основанные на модификации генетической информации.

Характеристика методов. Определяют генетические маркеры резистентности.

Особенности методов. Используют ПЦР, ПЦР-ПДРФ, ДНК-гибридизацию, секвенирование.

Техника проведения. Выделяют ДНК из материала от больных или из чистой культуры микроорганизмов. Проводят генетические исследования. Проводят сравнение с данными фенотипического анализа.

Принцип методов. У резистентных микроорганизмов присутствуют гены, контролирующие синтез ферментов, разрушающих антибиотики. У некоторых микроорганизмов резистентность связана с мутациями в генах, кодирующих структуры, на которые действует антибиотик. Изменение мишени приводит к резистентности (рис. 48).

Оценка чувствительности. Выявление у микроорганизма генетических маркеров резистентности свидетельствует о потенциальной устойчивости к антибиотику.

Оценка методов. Перспективны. На практике используются для диагностики антибиотикорезистентности микобактерий туберкулеза, а также для изучения генетических механизмов устойчивости в рамках регионального или национального мониторинга антибиотикорезистентности.

 

Рис. 48. Hain тест (реакция гибридизации на мембранах) для определения устойчивости к противотуберкулезным препаратам Mycobacterium spp. (на каждой тест-полоске верхние три горизонтальны полосы являются контролем, остальные свидетельствуют о видовой принадлежности и наличии мутаций в rpoB гене, обуславливающих устойчивость к рифампицину)

 

Выявление генетических маркёров резистентности целесообразно в тех случаях, когда традиционные фенотипические методы определения чувствительности микроорганизмов неприменимы или недостаточно эффективны. Например, определение чувствительности Mycobacterium tuberculosis к противотуберкулёзным препаратам с помощью культуральных методов занимает 4-8 нед. Кроме того, результаты фенотипических тестов могут быть искажены в связи со снижением активности антимикробных препаратов в процессе длительного культивирования микроорганизмов.

Факторы, влияющие на результаты определения антибиотикорезистентности:

1) состав питательной среды:

- содержание ионов Са2+ (не более 20-25 мг/л) и Mg2+ (не более 10-12,5 мг/л). Эти ионы инактивируют некоторые антибиотики (тетрациклины), при этом МИК антибиотика повышается;

- содержание тимина, тимидина, инактивирующих сульфаниламиды и триметоприм,

- рН среды (рис. 49).

 

Рис. 49. Влияние рН среды на диметры зон задержки роста некоторых антибиотиков

 

2) величина посевной дозы и состояние тест-микроорганизмов (инокулюм-эффект):

- культуры, длительное время хранившиеся на плотных или жидких питательных средах, обладают пониженными ростовыми свойствами, поэтому для оценки чувствительности необходимо использовать микроорганизмы, инкубировавшиеся не более 16-18 часов;

- увеличение концентрации инокулята с 105 КОЕ/мл до 107 КОЕ/мл может приводить к повышению МПК;

3) условия инкубации:

- изменение температуры инкубации может привести к торможению либо к увеличению скорости роста, поэтому посевы инкубируют при 350С;

- преждевременный или поздний учет результатов может привести к ошибочной оценке результатов, поэтому учёт проводят через 18-24 часа инкубации.

Причины несовпадений результатов определения активности препарата in vitro и его клинической эффективностью в лечении пациентов:

1) отсутствие адекватного хирургического лечения;

2) общее состояние пациента (возраст, питание, сопутствующие заболевания);

3) несвоевременное назначение антимикробной терапии;

4) низкая биодоступность препарата;

5) невозможность достижения бактерицидной концентрации в воспалительном очаге;

6) инактивация микробными ферментами.


1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 |

Поиск по сайту:



Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Студалл.Орг (0.004 сек.)