|
|||||||
АвтоАвтоматизацияАрхитектураАстрономияАудитБиологияБухгалтерияВоенное делоГенетикаГеографияГеологияГосударствоДомДругоеЖурналистика и СМИИзобретательствоИностранные языкиИнформатикаИскусствоИсторияКомпьютерыКулинарияКультураЛексикологияЛитератураЛогикаМаркетингМатематикаМашиностроениеМедицинаМенеджментМеталлы и СваркаМеханикаМузыкаНаселениеОбразованиеОхрана безопасности жизниОхрана ТрудаПедагогикаПолитикаПравоПриборостроениеПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРадиоРегилияСвязьСоциологияСпортСтандартизацияСтроительствоТехнологииТорговляТуризмФизикаФизиологияФилософияФинансыХимияХозяйствоЦеннообразованиеЧерчениеЭкологияЭконометрикаЭкономикаЭлектроникаЮриспунденкция |
Недостатки молекулярно-генетических методов1. Отсутствие международных протоколов по молекулярно-генетической диагностике различных нозологических форм заболеваний. 2. Необходимость разработки новых подходов к клинической интерпретации получаемых результатов. В этиологической диагностике заболеваний в настоящее время по-прежнему существуют «золотые стандарты», в основу которых положены культуральный или микроскопический методы исследования. Для постановки этиологического диагноза необходимы положительные результаты культурального и микроскопического методов, результаты молекулярно-генетических методов в настоящее время оцениваются как ориентировочные. Следует помнить, что выявление в клинических образцах ДНК сапрофитных и условно-патогенных микроорганизмов может не означать наличия патологического процесса и поэтому не может быть автоматически интерпретировано как диагноз, особенно на фоне благополучной клинической картины у пациента. По этой же причине следует с осторожностью использовать молекулярно-генетические методы для анализа образцов с полимикробным сообществом (испражнения, материал из верхних дыхательных путей, материал из гениталий). 3. Высокая стоимость оборудования. Для проведения молекулярно-генетических исследований необходимо комплексное оснащение лаборатории, включающее термоциклер, устройство для ДНК-электрофореза, трансиллюминатор, шейкеры, центрифуги, холодильники, дозаторы, секвенатор, гибридизационную камеру и другое оборудование. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФАКТОРОВ ПАТОГЕННОСТИ БАКТЕРИЙ 1. Белки фимбрий, адгезины, компоненты секреторной системы изучают следующим образом: – клетки дезинтегрируют ультразвуком; – белки осаждают; – проводят диализ для освобождения от балласта; – выделяют очищенный белок при помощи жидкостной хроматографии; – проводят электрофорез в полиакриламидном геле; – идентифицируют белок с использованием биомаркеров (меченых поликлональных антител); – изучают белок: определяют молекулярную массу методом масс-спектрометрии, 3D-структуру методом рентгеноструктурной кристаллографии. 2. Фимбрии выявляют с помощью: – негативного контрастирования с последующей электронной микроскопией (рис. 41); – изучения адгезии к поверхности культур клеток Hep2 и др.; – постановки маннозозависимой реакции гемагглютинации с эритроцитами разных видов животных: при добавлении эритроцитов к суспензии бактерий в присутствии 1% раствора D-маннозы происходит склеивание эритроцитов с образованием «зонтика». 3. Гены, кодирующие бактериальные гликаны (пептидогликан, капсульные полисахариды, липополисахариды, системы гликозилирования белков), определяют с помощью сравнительного компьютерного анализа секвенированного генома микроорганизма и геномов хорошо изученных микроорганизмов. Функции генов подтверждают клонированием этих генов в E. coli или нокаутируют эти гены с использованием сайт-специфического мутагенеза. 4. Поверхностные структуры клеточной стенки изучают с помощью сканирующей атомно-силовой микроскопии высокого разрешения (рис. 42). Поиск по сайту: |
Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Студалл.Орг (0.003 сек.) |