МЕТОДИКИ ИСЛЕДОВАНИЯ УГЛЕВОДНОГО ОБМЕНА

Для диагностики ряда заболеваний: сахарного диабета; патологических состояний, связанные с недостаточностью функции печени и почек; некоторых эндокринных заболеваний; новообразований мозга, поджелудочной железы и надпочечников; гиповитаминоза витамина В₁, а также ряда наследственных аферментозов – важно иметь объективное представление о состоянии углеводного обмена у больных. Основным показателем углеводного обмена является уровень глюкозы в крови. Концентрация глюкозы в крови взрослого человека составляет 3,3-5,5 ммоль/л.

Наряду с глюкозой в крови содержатся также фруктоза и связанные с белками полисахариды. Однако к исследованию уровня других сахаров и гликогена прибегают значительно реже.

Известную диагностическую ценность представляет также определение молочной и пировиноградной кислот, активности ряда ферментов углеводного обмена и другие показатели.

Определение глюкозы в крови.

Существует несколько групп методов определения глюкозы:

1. Редуктометрические методы – основаны на свойстве сахаров восстанавливать в щелочной среде соли тяжелых металлов (метод Хагедорна-Йенсена). Метод малоспецифичен, но не нуждается ни в дорогостоящих реактивах, ни в аппаратуре. В настоящее время не используется.

2. Методы химические – основаны на использовании цветных реакций, в которых участвуют продукты, образующиеся при нагревании углеводов с концентрированными кислотами (орто-толуидиновый метод). Метод специфичен, прост в выполнении, но по ходу реакции необходимо кипятить пробы с концентрированной уксусной кислотой, поэтому работать необходимо под тягой или в специальном помещении. Кроме того, орто-толуидин крайне токсичен.

3. Ферментативные методы – сочетают в себе высокую точность и простоту анализа (глюкооксидазный метод). Метод высоко специфичен.

4. В последние годы распространение получают методы экспресс-диагностики глюкозы с помощью биохимических анализаторов. В основе этих методов лежит использование глюкозооксидазной мембраны.

5. Метод «сухой химии».

Определение глюкозы глюкооксидазным методом.

Принцип метода: глюкоза окисляется кислородом при каталическом действии фермента глюкооксидазы с образованием перекиси водорода и глюконата. Образовавшуюся перекись водорода определяют по реакции окислительного азосочетания производного фенола с 4-аминофеназом, катализируемой пероксидазой.

Реактивы.

1. Эталон глюкозы с концентрацией 10 ммоль/л. для работы приготовляют ежедневно стандартный раствор с концентрацией 10 ммоль/л, смешивая 2,00 мл эталона и 3,00 дистиллированной воды.

2. Глюкозовый реактив. Содержимое флаконов с реактивом 3 (буферный раствор), реактивом 4 (смесь ферментов) и реактивом 5 (хромоген) последовательно растворяют в 100 мл дистиллированной воды, разбавляют водой до 500 мл и перемешивают. В темном месте при t - 5°С глюкозовый реактив устойчив примерно 1 неделю.

3. Депротеинирующий раствор.

Поиск по сайту: