Задание 5. Детектирование хинина в УФ-лучах

Пронаблюдайте флюоресценцию алкалоида хинина в УФ-свете. Для этого нанесите каплю раствора хинина сульфата на фильтровальную бумагу и поместите ее в хромоскоп под УФ-лучи.

В УФ-свете наблюдается голубоватая флуоресценция.

В Европейской Фармакопеи описан следующий опыт для подтверждения подлинности коры хинного дерева.

Реакция Грахе: 0,5 г порошка хинной коры помещают в пробирку и осторожно нагревают на открытом огне. Появляются малиновые пары, оседающие на холодных стенках пробирки в виде ярко-красных капель. Конденсат собирают в пробирку с 10 мл 70% спирта и просматривают раствор в УФ-свете с длиной волны 365 нм. Хинные алкалоиды имеют голубую флюоресценцию.

Задание 6. Хроматогрофический анализ алкалоидов

Проведите хроматографический анализ ЛРС (по заданию преподавателя). Зарисуйте схему хроматограммы и рассчитайте величину R_f в экстракте и достоверных образцов. Сделайте вывод о содержании алкалоидов в образце ЛРС.

Схема хроматографического анализа

Для опыта используют бумажную или тонкослойную хроматографию.

1. На линию старта хроматографической пластинки (или фильтровальной бумаги) нанесите раствор извлечения из ЛРС и раствор свидетеля.

2. Поместите пластинку (или бумагу) в хроматографическую камеру, в которую налита одна из предложенных систем растворителей: хлороформ – ацетон – концентрированный аммиак (40:20:1); н-бутанол – хлороформ (1:9); этанол – бензол (1:9); ацетон – вода – концентрированный раствор аммиака (90:7:3).

3. После прохождения фронта пластинку просушите в сушильном шкафу при температуре 40-45 ˚С.

4. Детектирование хроматограммы проводят реактивом Драгендорфа, парами йода, в УФ-свете.

5. Для проявившихся пятен алкалоидов рассчитайте значения R_f по формуле:

,	где А - расстояние от линии старта до пятна В - расстояние от линии старта до фронта подвижной жидкости

*Примечание: Если разделение алкалоидов проводят на пластинке «Силуфол», то перечисленные йодосодержащие реактивы не используют, так как носитель на пластинке закреплен с помощью крахмала. В данном случае используют УФ-излучение.

Задание 7. Количественное определение алкалоидов в листьях красавки и белены (ГФ XI, том 2, ФС 13, ФС 17)

В листьях красавки и белены содержатся алкалоиды производные тропана. В этом виде сырья преобладает гиосциамин, переходящий под влиянием щелочей в оптически инактивный атропин. Кроме того, содержится скополамин и другие близкие по строению алкалоиды.

Количественное определение содержания суммы алкалоидов, производится титрометрическим методом (обратное титрование).

1. Запишите в тетрадь для практических работ формулы атропина и скополомина.

2. Рассмотрите предложенную в ГФ методику количественного определения тропановых алкалоидов и запишите коротко в виде предложенной схемы (таблицы).

3. Проведите количественное определение тропановых алкалоидов в сырье растений семейства пасленовых, рассчитайте результат и сделайте заключение о соответствии исследуемого сырья требованиям нормативной документации.

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром I мм. Около 10 г измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 250 мл, приливают 150 мл эфира, 7 мл раствора аммиака и взбалтывают смесь в течение 1 ч. Эфирное извлечение быстро фильтруют через вату в колбу вместимостью 200 мл, прикрывая воронку часовым стеклом. К фильтрату приливают 5 мл воды, энергично взбалтывают и оставляют до просветления эфирного слоя, после чего отмеривают с помощью мерного цилиндра 90 мл эфирного извлечения в делительную воронку вместимостью 200 мл. Цилиндр дважды ополаскивают эфиром порциями по 10 мл, которые присоединяют к отмеренному эфирному извлечению.

Из эфирного извлечения алкалоиды максимально извлекают 1 % раствором хлористоводородной кислоты порциями по 20, 15, 10 мл (проба с реактивом Майера), каждый раз фильтруя через смоченный водой бумажный фильтр диаметром 5 см во вторую делительную воронку такой же вместимости. Фильтр промывают дважды 1 % раствором хлористоводородной кислоты по 5 мл, присоединяя промывную жидкость к общему кислотному извлечению.

Кислотное извлечение подщелачивают раствором аммиака до щелочной реакции по фенолфталеину и алкалоиды извлекают последовательно 20, 15, 10 мл хлороформа, взбалтывая по 3 мин. Хлороформные извлечения фильтруют в колбу для отгонки вместимостью 100 мл через бумажный фильтр, на который предварительно помещают 4—5 г свежепрокаленного безводного натрия сульфата, смоченного хлороформом. Фильтр дважды промывают хлороформом по 5 мл. Хлороформ отгоняют на водяной бане до объема 1—2 мл, остаток хлороформа в колбе удаляют продуванием воздуха до полного исчезновения запаха растворителя.

Сухой остаток растворяют в 15 мл раствора хлористоводородной кислоты (0,02 моль/л) при подогревании на водяной бане, прибавляют 2 капли спиртового раствора метилового красного и 1 каплю раствора метиленового синего и избыток хлористоводородной кислоты оттитровывают раствором натра едкого (0,02 моль/л) до появления зеленой окраски.

Содержание суммы алкалоидов в пересчете на гиосциамин абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

,

где 0,005780 — количество алкалоидов в пересчете на гиосциамин, соответствующее 1 мл раствора хлористоводородной кислоты (0,02 моль/л), в граммах;

V — объем раствора натра едкого (0,02 моль/л), израсходованного на титрование, в миллилитрах;

т — масса сырья, соответствующая отмеренному объему эфирно­го извлечения, в граммах;

W — потеря в массе при высушивании сырья в процентах.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ К ИЗУЧАЕМОЙ ТЕМЕ

1. Дайте определение понятия «алкалоиды».

2. Перечислите классификацию алкалоидов, предложенную акад. А.П. Ореховым. Приведите примеры.

3. Напишите общие формулы соединений, по классификации Орехова, а также формулы следующих алкалоидов: эфедрина, капсаицина, платифиллина, анабазина, гиосциамина, скополамина, термопсина, цитизина, хинина, морфина, кодеина, папаверина, хелидонина, лизиргиновой кислоты, гармина, пеганина, кофеина, теобромина.

4. Расскажите о распространении алкалоидов в растительном мире и их локализации в органах и тканях растений.

5. Охарактеризуйте влияние онтогенетических факторов и условий среды на накопление алкалоидов.

6. Охарактеризуйте физико-химические свойства алкалоидов.

7. Обоснуйте методы выделения и очистки алкалоидов из растительного сырья.

8. Расскажите, как выделить алкалоиды из ЛРС в форме солей.

9. Расскажите, как выделить алкалоиды из ЛРС в форме оснований.

10. На каких свойствах алкалоидов основана очистка растительных экстрактов алкалоидов?

11. Перечислите методы обнаружения алкалоидов в растительном сырье.

12. Перечислите типы качественных реакций на алкалоиды. Приведите примеры.

13. Обоснуйте фармакопейный метод количественного определения алкалоидов тропанового ряда в растения семейства пасленовые.

Поиск по сайту: