Среды для идентификации микроорганизмов

Консервирующие (10% глицерин).

Рост бактерий в жидких питательных средах:

1 ) равномерное помутнение среды типично для большинства факультативно-анаэробных бактерий; при этом степень помутнения может быть слабой, умеренной или сильной;

2) придонное или пристеночное помутнение среды специфично для стрептококков и облигатно анаэробных бактерий; осадок может быть плотным, рыхлым, слизистым или хлопьевидным;

3) плёнка на поверхности среды характерна для аэробов, плёнка может быть тонкой, плотной, рыхлой, гладкой, складчатой. Рост в виде пленки характерен, напр., для Yersinia pestis (от пленки вниз спускаются нити- «сталактиты») и Vibrio cholera (нежная пленка).

Рост бактерий на плотных питательных средах.

Размер (диаметр): точечные - до 1мм, мелкие - 1-2мм, средние - 2-4мм, крупные - >4мм. Форма: правильная (круглая), неправильная (волокнистая). Край. Поверхность: матовая, блестящая, складчатая, морщинистая. Прозрачность: непрозрачные (стафилококки, бациллы), полупрозрачные (энтеробактерии, бактероиды), прозрачные как «капельки росы» (гонококки, вибрионы). Консистенция: вязкая, тянущаяся или сухая, плотная. Профиль: плоский, высокий, выпуклый, подушечкообразный, кратерообразный, конусовидный. Цвет.

– гладкие, илиS-колонии имеют ровные края, гладкую поверхность; они выпуклые, блестящие. S-формы более вирулентны.

– шероховатые, или R-колонии имеют неровный край, исчерченную поверхность, они плоские, не блестят. R-формы часто авирулентны. Такой вид колоний связан с гидрофобностью наружных оболочек бактерий из-за отсутствия в них гидрофильных полисахаридов.

– слизистые, или мукоидные, или М-колонии – у клебсиелл, имеющих выраженную полисахаридную макрокапсулу;

– карликовые,или D-колонии – у микоплазм и L-форм; видны только под малым увеличением микроскопа.

Приготовление питательных сред.

Этапы:

1. Взвешивают навеску сухой концентрированной среды в соответствии с инструкцией по применению.

2. Растворяют навеску в соответствующем объеме дистиллированной воды.

3. Доводят до кипения при постоянном перемешивании и кипятят 1 мин до полного растворения компонентов. Доводят рН среды до требуемой величины - обычно, 7,2±0,2.

4. Разливают среду в подготовленную посуду, закрывают ватно-марлевыми пробками, стерилизуют в автоклаве при +1210С в течение 15 мин. Среды с углеводами стерилизуют при +1150С в течение 15 мин.

5. После охлаждения среды до 45-500С добавляют при необходимости селективные и/или стимулирующие добавки: 5% крови, 5% сыворотки, антибиотики, гемин, витамины и др., тщательно перемешивают.

6. Разливают среду в стерильные чашки Петри по 20 мл на чашку (чтобы глубина агарового слоя составляла не менее 4 мм), равномерно распределяют, оставляют до застывания. Используют стерильные одноразовые пластиковые чашки Петри или стеклянные, многоразового использования, предварительно простерилизованные.

7. После застывания среды её подсушивают от конденсата в термостате в течение 30 мин. Для этого на полку термостата кладут лист фильтровальной бумаги и помещают чашку так, чтобы крышка служила опорой для края её дна, перевёрнутого средой вниз.

8. При необходимости чашки Петри с готовой средой можно хранить в запаянном полиэтиленовом пакете при +2+80С в течение 7-10 суток; перед посевом среды подсушивают в термостате до исчезновения конденсата на внутренней поверхности крышки.

Поиск по сайту: