Механизм действия антибиотиков

1. Ингибиторы синтеза клеточной стенки. бета-лакткмные.
2. Ингибиторы синтеза белка (левомицитин, тетрациклин, аминогликозиды, макролиды, хлорамфеникол).
3. Ингибиторы синтеза ДНК (фторхинолон) и РНК (рифамицин).
4. Ингибиторы функции цитоплазматической мембраны (нистатин, полимиксины) – открывают каналы.
5. Подавление синтеза НК:

а) РНК на уровне РНК – полимеразы.

б) ДНК на уровне ДНК

в) разрушение ДНК – гиразы (фторхинолоновые).

Побочное действие антибиотиков.

1. Аллергические реакции (наиболее частые).
2. Вызывают дизбактериозы.
3. Оказывают токсическое действие (ото, нефро, гепато, гемопоэз)
4. Иммунодепрессивное действие.
5. Возникновение антибиотико-устойчивых форм бактерий.

Естественная и приобретённая резистентность микроорганизмов к антибиотикам и химиотерапевтическим препаратам. Генетические и биохимические механизмы образования резистентных форм микроорганизмов.

Устойчивость МО к антибиотикам.

1. Естественная: у микоплазм нет КС, анаэробы к аминогликозидам.
2. Приобретенная:

а) фенотипическая

б) генотипическая – связана с изменением генетической активности, носит стойкий наследственный характер (мутации, рекомбинации).

А) Первичная – до взаимодействия с антибиотиком

Б) Вторичная – после.

Пути возникновения:

1. Спонтанные мутации в ДНК
2. эписомальный или плазмидный (наличие R плазмиды)

Культура считается устойчивой, если ее рост не подавляется теми минимальными конц. антибиотика, которые обычно подавляют бактерии этого вида.

Биохимические аспекты устойчивости:

1. Синтез ферментов, разрушающих АБ
2. Модификация мишени, на которую действуют антибиотики.
3. Изменение проницаемости клеточной стенки для антибиотика.
4. Повышение скорости выведения антибиотика – эффлюкс.
5. Обходные пути метаболизма – шунты.

Генотипические и фенотипические методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Мониторинг резистентности микроорганизмов к антибиотикам в клинической практике. Понятие об эмпирической терапии. Профилактическое назначение антибиотиков.

МИК - минимальная ингибирующая (подавляющая) концентрация -наименьшая концентрация антибиотика,которая подавляет видимый рост исследуемого микроорганизма in vitro (в бульонных или на агаровых питательных средах) в стандартных условиях постановки опыта и выражается в мкг/мл (мг/л) или ед/мл.

Минимальная бактерицидная концентрация (МБК)- наименьшая концентрация антибиотика, которая при исследовании in vitro вызывает гибель 99,9% микроорганизмов от исходного уровня в течение определённого периода времени.

Чувствительный МО - штамм, который не имеет механизмов резистентности к данному препарату. Его рост на питательной среде прекращается при использовании антибиотика в терапевтической дозе.

Умеренно-резистентный МО - штамм, рост которого на питательной среде прекращается только при использовании антибиотика в высшей дозе.

Резистентный МО - штамм, который имеет механизмы резистентности к данному препарату. Его рост на питательной среде прекращается лишь при использовании очень высоких концентраций препарата, которые нельзя создать в организме из-за их высокой токсичности.

Показания к определению чувствительности МО к антибиотикам:

1) определение чувствительности к новому антибиотику, рекомендуемому к применению;

2) периодический мониторинг антибиотикорезистентности в отдельных медицинских центрах и в различных географических регионах с целью наблюдения за распространием антибиотикорезистентности;

3) обоснование адекватной антибиотикотерапии у отдельных больных в случаях:

а) выделения МО из первично стерильных жидкостей, орга­нов и тканей человека,

б) при выделении МО из первично нестерильных биотопов, оценке чувствительности должна предшествовать оценка клинической значимости выделенного МО;

в) инфекций, резистентных к препаратам эмпирической терапии;

г) уникальных инфекций и отсутствии опыта их терапии;

д) инфекций, требующих пролонгированной терапии.

Этапы:

1. Выделение чистой культуры МО и приготовление суспензии МО.
2. Приготовление среды.
3. Инокуляция среды МО.
4. Инкубация.
5. Учет результатов, анализ, формулирование рекомендаций по лечению.
6. Периодический контроль качества тестирования с использованием штаммов из международных коллекций МО.

Диско-диффузионный метод. Полуколичественный. Определяет группы антибиотиков, активных в отношении патогена. Используют стандартные диски диаметром 6,25 мм, представляющие собой фильтровальный картон, пропитанный антибиотиком в определенной концентрации. Готовят суспензию тест-МО в концентрации 1,5х10⁸ КОЕ/мл, наносят ее в объеме 1 мл на чашку Петри со средой агар Мюллер-Хинтона. Суспензию распределяют равномерно по поверхности, избыток суспензии удаляют, поверхность среды высушивают, наносят на среду диски на расстоянии 2 см друг от друга и от края, но не более 6 на чашку Петри, инкубируют при 35⁰С 18–24 часа. Можно использовать специальный диспенсер для одновременного нанесения 6 дисков. Определяют диаметр зон задержки роста в мм и сравнивают со стандартными величинами зон задержки роста, на основании чего относят МО к чувствительным, умеренно чувствительным или резистентным. Оценка метода. Простой, нетрудоемкий, относительно дешевый, обладает высокой воспроизводимостью. Основной метод в клинических лабораториях для нетребовательных МО.

Метод разведений в агаре. Количественный. Определяет активные препараты и их ингибирующие концентрации. Готовят 8 - 12 серийных двукратных разведений антибиотика в агаре Мюллер-Хинтона. МО растут на среде, если концентрация антибиотика ниже ингибирующей и не растут - если больше. Определяют МИК антибиотика для тест-культуры и сравнивают со стандартными величинами МИК. Относят тест-культуру к чувствительным, умеренно чувствительным или резистентным. Оценка метода. Метод трудоемкий, требует затрат большого количества сред, посуды, времени. Основной метод регионального или национального мониторинга антибиотикорезистнтности.

Метод разведений в жидких средах. Количественный. Определяет активные препараты и их ингибирующие концентрации. Готовят 8 - 12 серийных двукратных разведений антибиотика в пробирках с бульоном Мюллер-Хинтона. МО растут на среде, вызывая ее помутнение, если концентрация антибиотика ниже ингибирующей, и не растут - если больше (среда прозрачна). Определяют МИК тест-культуры и сравнивают со стандартными величинами МИК. Относят тест-культуру к чувствительным, умеренно чувствительным или резистентным. Оценка метода. Метод трудоемкий, требует затрат большого количества сред, посуды, времени. Основной метод регионального или национального мониторинга антиботикорезистнтности.

Е-тест (эпсилометрический метод). Количественный. Определяет активные препараты и их ингибирующие концентрации. Используют стандартные пластиковые полоски с нанесенным на них экспоненциально убывающим градиентом концентрации антибиотика, например от 256 до 0,016 мкг/мл. Готовят суспензию тест-МО в концентрации 10⁸ КОЕ/мл, погружают в нее стерильный тампон, равномерно штриховыми движениями распределяют суспензию по поверхности среды Мюллер-Хинтона, поверхность среды высушивают. На чашку диаметром 90 мм наносят не более 2 полосок E-теста, инкубируют при 35⁰С 16–18 часов. Антибиотик из Е-теста центробежно диффундирует в среду, в месте его активного действия рост МО подавляется и образуется эллипсоидная (каплевидная) зона задержки роста Место пересечения основания эллипса со шкалой концентраций E-теста соответствует МИК антибиотика. Ингибиция роста МО вокруг полоски-носителя происходит только в той зоне, где концентрация антибиотика выше МИК. Определяют МИК тест-культуры и сравнивают со стандартными величинами МИК. Относят тест-культуру к чувствительным, умеренно чувствительным или резистентным. Оценка метода. Простой, не трудоемкий, позволяет тестировать привередливые микроорганизмы (стрептококки, пневмококки, гемофилы, гонококки, анаэробы). Не получил широкого распространения из-за дороговизны.

Ускоренный метод. Полуколичественный или количественный. Позволяет получить результат через 4-6 часов. Основан на выявлении начальных стадий роста бактерий. Используют индикаторы окислительно-восстановительного потенциала (ОВП) - хлорид тетразолия или индикаторы рН среды, которые позволяют выявлять рост МО на ранних стадиях.Определение чувствительности проводят либо диско-диффузионным методом, либо методом разведений в бульоне. Обрабатывают индикатором ОВП - хлоридом тетразолия. В местах роста микроба среда окрашивается в красный цвет, при отсутствии роста микроба цвет среды не изменяется. В случае использования индикатора рН, если антибиотик не активен, то МО растут и выделяют кислые метаболиты, индиктор рН меняет цвет. Если антибиотик активен, то МО погибают и среда не изменяет свой цвет. Оценка результатов проводится по диаметру неокрашенных зон вокруг дисков. В жидких средах по изменению цвета среды в пробирках определяют МИК антибиотика. Оценка метода. Простой, ориентировочный.

Автоматизированнный метод с использованием автоматических микробиологических анализаторов. Количественный. Определяет активные препараты и их ингибирующие концентрации, прогнозирует механизмы устойчивости, позволяет создавать компьютерную базу резистентности всех исследованных культур к антиботикам. Если концентрация антибиотика не активна, МО растут и размножаются, вызывая увеличение мутности среды, снижение рН среды и изменение цвета индикатора. Если концентрация антибиотика активна, то МО не изменяют мутность и цвет среды. Прибор автоматически проводит нефелометрию и спектрофотометрию и по изменению мутности и цвета среды определяет МИК тест-культуры. Сравнивает ее со стандартными величинами МИК и относит тест-культуру к чувствительным, умеренно чувствительным или резистентным штаммам. Оценка метода. Стандартный, из-за автоматизации прост в исполнении, позволяет получать результаты через 5–8 часов, позволяет создавать электронную базу данных и сравнивать данные из различных лабораторий. Требует дорогостоящего автоматического анализатора.

Генетические методы. Определяют генетические маркеры резистентности. Используют ПЦР, ДНК-гибридизацию, секвенирование. У резистентных МО присутствуют гены, контролирующие синтез ферментов, разрушающих антибиотики. Выявление генетических маркеров резистентности свидетельствует о потенциальной устойчивости к антибиотику. Оценка методов. Перспективны. На практике используются для диагностики антибиотикорезистентности микобактерий туберкулеза, а также для изучения генетических механизмов устойчивости в рамках регионального или национального мониторинга антибиотикорезистентности.

Антибиотикопрофилактика показана в предоперациооный период.

Антибиотикотерапия бывает 2-х видов: эмпирическая и этиотропная.
Эмпирическую терапию мы используем ежедневно, назначая антибактериальные препараты не зная наверняка, какой именно возбудитель вызвал заболевание, но предполагая совершенно определенный спектр возбудителей, вызывающих данную инфекцию, а пациента лечить надо здесь и сейчас, так как при многих состояниях задержка с назначением адекватной терапии увеличивает летальность в 2 – 3 раза.
Этиотропную терапию мы используем, когда баклаборатория выдает нам результаты посева и чувствительности к антибиотикам (как мы помним, результаты приходят через 3 – 5 дней) и мы либо меняем терапию кардинально, либо вносим коррекцию, либо вообще ничего не делаем, так как эмпирическая терапия оказывается верной.

Поиск по сайту: