Культуральный (бактериологический) метод исследования: определение, цели, этапы, оценка

Культуральный (бактериологический) метод исследования - совокупность способов, направленных на выделение и идентификацию чистых культур МО с помощью культивирования на питательных средах.

Чистая культура - совокупность МО одного вида. Чаще всего чистую культуру получают путем отбора и культивирования изолированной колонии (потомство одной микробной клетки).

Цели:

1. Постановка этиологического диагноза.

2. Определение дополнительных свойств, например, чувствительности микроорганизма к антибиотикам и бактериофагам.

3. Определение количества МО.

4. Типирование МО, т. е. определение внутривидовых различий на основании изучения генетических и эпидемиологических (фаговаров и сероваров) маркёров.

Этапы:

1 этап.

А. Забор, транспортировка, хранение, предварительная обработка материала. Иногда до посева проводят селективную обработку материала с учетом свойств выделяемого МО: перед исследованием на присутствие кислотустойчивых микобактерий туберкулеза, материал обрабатывают растворами кислот или щелочей.

Б. Посев в среду обогащения (при необходимости). Его проводят, если в исследуемом материале содержится малое количество бактерий, например, при выделении гемокультуры. Посев инкубируют при температуре 370С 18-24 ч.

В. Микроскопия исследуемого материала. Из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают его по Граму или другим методом и микроскопируют. Оценивают присутствующую микрофлору, ее количество. В ходе дальнейших исследований должны быть выделены МО, присутствовавшие в первичном мазке.

Г. Посев на питательные среды с целью получения изолированных колоний. Производят посев материала петлёй или шпателем методом механического разобщения на чашку с дифф-диагностической или селективной средой с целью получения изолированных колоний. Инкубируют при температуре 370С на 18-24 ч.

2 этап.

А. Изучение морфотипов колоний на средах, их микроскопия. Просматривают чашки и отмечают оптимальную питательную среду, скорость роста, характер роста микроорганизмов. Для изучения выбирают изолированные колонии, расположенные по ходу штриха, ближе к центру. Если вырастает несколько типов колоний – каждый исследуется в отдельности. Оценивают признаки колоний. Готовят мазок, окрашивают по Граму или другими методами, микроскопируют и определяют морфологию чистоты культуры. При необходимости ставят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с поливалентными сыворотками.

Б. Накопление чистой культуры. Для накопления чистой культуры изолированные колонии всех морфотипов пересевают в отдельные пробирки со скошенным агаром или какой-либо другой питательной средой и инкубируют в термостате при +370С.

В качестве среды накопления для энтеробактерий обычно используют среду Клиглера.

Состав среды Клиглера: МПА, 0,1% глюкозы, 1% лактозы, реактив на сероводород (сернокислое железо + тиосульфат натрия + сульфит натрия), индикатор феноловый красный. Изначальный цвет среды малиново-красный, среда «скошена» в пробирках: имеет столбик (2/3) и скошенную поверхность (1/3).

Посев в среду Клиглера производится штрихом по поверхности и уколом в столбик.

3 этап.

А. Учет роста на среде накопления, оценка чистоты культуры в мазке по Граму. Отмечают характер роста выделенной чистой культуры. Визуально чистая культура характеризуется однородным ростом. При микроскопическом исследовании окрашенного мазка, приготовленного из такой культуры, в нём в разных полях зрения обнару­живаются морфологически и тинкториально однородные клетки.

Б. Окончательная идентификация чистой культуры (определение систематического положения выделенного микроорганизма до уровня вида или варианта) и определение спектра чувствительности выделенной культуры к антибиотикам.

4 этап.

А. Учет и анализ результатов.

Б. Выдача заключения.

Оценка БЛМИ.

Достоинства: относительно высокая чувствительность (около 102 МО в мл); относительно высокая специфичность (возможность установления этиологии заболевания); возможность определения количества МО в исследуемом материале; возможность определения спектра чувствительности выделенной чистой культуры к антибиотикам; ранний метод исследования (может применяться с первых дней заболевания).

Недостатки: относительная длительность; трудоёмкость; опасность инфицирования;

дорогостоящий.

Питательные среды: требования, классификации (по происхождению, составу, консистенции, назначению, цели использования), приготовление. Рост бактерий в жидких и на плотных питательных средах.

Требования к питательным средам. Должны: содержать все элементы, быть влажными, чтобы процесс диффузии питательных веществ в клетку проходил без затруднений; быть прозрачными (жидкие среды), чтобы можно было визуально наблюдать за ростом МО; быть стерильными, быть изоосмотичными (за счет 0,85% NaCl); иметь определённое значение pH и обладать буферными свойствами.

Классификации питательных сред

I. По происхождению:

Поиск по сайту: