Препараты поджелудочной железы

Инсулин (от лат. insula — остров) — гормон поджелудочной железы. Химическая природа его - белок.

Получение инсулина состоит из следующих стадий:

1. Измельчение замороженных поджелудочных желез и экстракция кислым спиртовым раствором.

2. Осаждение балластных белков (рН 7,5) и освобождение от
липидов.

3. Изоэлектрическое осаждение фракции инсулина (при
рН 5,5) и осаждение спиртом, ацетоном, эфиром.

4. Очистка инсулина: осаждение солями, фракционирование
методами хроматографии, гель-фильтрации и др.

5. Осаждение инсулина в виде кристаллов.

6. Переосаждение цинк-инсулина.

Свежие или замороженные поджелудочные железы измельчают на мясорубке-волчке и экстрагируют способом бисмацерации первый раз 80—85% этанолом в реакторе с мешалкой. Второй раз экстрагируют 57% этанолом, который подкислен ортофосфорной кислотой (хлороводородной или серной) до значения рН 2,8—3. Экстракцию проводят 1,5—4 ч при постоянном перемешивании. Подкисленный спирт способствует инактивации фермента трипсина, находящегося в поджелудочной железе, благодаря чему удается сохранить инсулин в неизмененном состоянии.

Полученные вытяжки объединяют, оставляют на холоде, на 48 ч для освобождения от нежелаемых белков, которые выпадают в виде осадка. Осадок отделяют центрифугированием и удаляют. Затем для выделения и очистки инсулина применяют ионообменную хроматографию (наиболее прогрессивный способ очистки). Осуществляют сорбцию инсулина из прозрачной жидкости на макропористом сульфокатионите КУ-33-30/100 при значении рН 3,0—3,3 в режиме псевдоожижения. Жир удаляют путем промывки катионита 65—67% этанолом, при этом балластные белки удаляют промыванием 0,3 М раствором ацетатного буфера (рН 5,3).

Десорбцию инсулина осуществляют быстро с помощью 0,01— 0,05 М раствора аммонийного буфера (при рН 10) и немедленно подкисляют кислотой хлороводородной до значения рН 4,5 и добавляют ацетон. Выпавший осадок балластных веществ удаляют. Инсулин осаждают раствором цинка ацетата (при рН 6,2) — получают цинк-инсулин, который очищают кристаллизацией. Цинк-инсулин растворяют в воде, подкисленной кислотой лимонной до значения рН 2,8. Раствор отстаивают 1 ч, выпавший осадок балластных белков удаляют фильтрованием через кизельгур. Фильтрат смешивают с ацетоном, добавляют цинк хлористый и фенол, охлаждают до температуры 0 °С. Для медленной кристаллизации инсулина создают условия с последовательным постепенным изменением рН раствора. Раствор подщелачивают до значения рН 8,5; оставляют на 2—3 мин, затем создают значение рН 6,8, перемешивают 1 ч; при значении рН 6,5 перемешивают 2 ч; при значении рН 6,2 и 6,0 перемешивают 2 ч и отстаивают 20 ч; при значении рН 5,8 перемешивают 2 ч и отстаивают 48— 96 ч при температуре 5 °С. Выпавшие кристаллы инсулина отделяют центрифугированием, промывают на воронке Бюхнера последовательно холодной водой очищенной, ацетоном, эфиром. Досушивание проводят на воздухе, в вытяжном шкафу и эксикаторе.

Поиск по сайту: