 |
АвтоАвтоматизацияАрхитектураАстрономияАудитБиологияБухгалтерияВоенное делоГенетикаГеографияГеологияГосударствоДомДругоеЖурналистика и СМИИзобретательствоИностранные языкиИнформатикаИскусствоИсторияКомпьютерыКулинарияКультураЛексикологияЛитератураЛогикаМаркетингМатематикаМашиностроениеМедицинаМенеджментМеталлы и СваркаМеханикаМузыкаНаселениеОбразованиеОхрана безопасности жизниОхрана ТрудаПедагогикаПолитикаПравоПриборостроениеПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРадиоРегилияСвязьСоциологияСпортСтандартизацияСтроительствоТехнологииТорговляТуризмФизикаФизиологияФилософияФинансыХимияХозяйствоЦеннообразованиеЧерчениеЭкологияЭконометрикаЭкономикаЭлектроникаЮриспунденкция
Опыт 1. Определение концентрации пировиноградной кислоты (ПВК) в моче
Приборы. 1. Штатив с пробирками.
2. Набор пипеток.
3. Фотоколориметр.
4. Кюветы, 0,5 см.
Реактивы. 1. Дистиллированная вода.
2. Моча.
3. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.
4. 2,4-динитрофенилгидразин, раствор.
ПВК крови конденсируется с 2,4-динитрофинилгидразином с образованием гидразона, который в щелочной среде дает коричнево-красный цвет раствора. По интенсивности его окраски судят о содержании ПВК.
1. В три пробирки внесите реактивы согласно следующей таблице:
| Раствор | Опытная проба, мл | Калибровочная проба, мл | Контрольная проба, мл |
| Исследуемый образец | - | - | |
| Калибр. раствор пирувата* | - | - | |
| Дистиллированная вода | - | - | |
| 2,4-динитрофенилгидразин | 0,8 | 0,8 | 0,8 |
2. Содержимое пробирок на 15 мин поместите в темное место при комнатной температуре.
3. В каждую пробирку внесите по 1 мл 10%-го раствора NаOH и через пять минут измерьте оптическую плотность при длине волны 620 нм опытной пробы против контрольной (О) и калибровочной пробы против контрольной (К).
4. Расчет проведите по следующей формуле:
Концентрация ПВК = 
5. Расчет проведите и по готовому калибровочному графику.
Калибровочный график зависимости величины оптической плотности раствора (D) от концентрации ПВК в пробе.
Расчетсодержания ПВК в суточной моче (на диурез 1500 мл):
= мг/сутки
Для пересчета содержания ПВК (в мг) в единицы количества вещества (мкмоль) надо умножить соответствующие величины на 11,4 (коэффициент пересчета).
Норма для человека: 10-25 мг/сутки или 114-284 мкмоль/сутки пировиноградной кислоты.
Сравните полученные значения с нормальными величинами. Каковы причины повышенного содержания пировиноградной кислоты в сыворотке крови и моче?
Опыт 2. Определение активности сукцинатдегидрогеназы мышц.
Приборы. 1. Штатив с пробирками.
2. Набор пипеток.
3. Ступка с пестиком.
4. Водяная баня.
Реактивы. 1. Мышечная ткань курицы или кролика.
2. Янтарная кислота, 5%-ный раствор.
3. Метиленовая синь, 0,01%-ный раствор.
4. Растительное масло.
5. Стеклянный песок.
1. Взвесьте 10 г мышечной ткани и разотрите в ступке со стеклянным песком.
2. Полученный гомогенат промойте несколько раз на марле физраствором, для удаления растворимых веществ.
3. Полученную смесь разлейте по 5 мл в три пронумерованные пробирки.
4. Первую пробирку погрузите на 5 минут в кипящую водяную баню, после чего охладите ее до комнатной температуры.
5. В пробирку №1 и №2 добавьте 3 мл 5%-ной янтарной кислоты и 3 капли раствора метиленового синего (до появления голубого окрашивания).
6. В пробирку №3 добавьте 0,5 мл дистиллированной воды и 3 капли раствора метиленового синего (до появления голубого окрашивания).
7. Затем во все пробирки налейте немного масла для изоляции смеси от кислорода воздуха.
8. Все пробирки инкубируйте в водяной бане (40оС) в течение 10 минут.
Дайте объяснение наблюдаемым явлениям. Какова функция метиленовой сини в данном эксперименте? На какое соединение эта функция возлагается в живой клетке?
Поиск по сайту: