Методике фаготипирования

Суточную агаровую культуру стафилококка засевают в 2,5 мл бульо­на Хоттингера, Мартена или МПБ (рН 7,2-7,4) и выращивают 3-4 часа при 37° (до появления заметной мути).

Одновременно готовят чашки с 1,2% агаром, приготовленным на бульоне Хоттингера с добавлением свежей мясной вода (рН 7,6; глюко­зы 0,4%). CaCl₂ добавляют в расплавленный агар непосредственно перед разливом (0,2 мл стерильного 10%-ного раствора CaCl₂ на, 100 мл агара). По 25-30 мл расплавленного агара разливают в чашки Петри и после застывания подсушивают чашку 30-40 минут при 37°. Затем 3-4-часовую испытуемую культуру стафилококка пастеровской пипеткой за­севают газоном, избыток культуры удаляют пипеткой, а чашку подсуши­вают 30-40 минут.

Дно засеянной чашки расчерчивают карандашом на 23 квадрата и в каждый квадрат засеянной среды стандартной петлей (диаметр 2 мм) или тонко оттянутой пипеткой наносят каплю соответствующего фага всегда в одном и том же порядке.

После подсыхания фага чашку переворачивают крышкой вниз и инкубируют 18-20 часов при 30⁰ или 5-6 часов при 37⁰ и оставляют до следующего утра при комнатной температуре.

Фаготипирование начинают рабочим разведением фагов, соответст­вующим I ТР. Шгаммы, с которыми получен отрицательный результат, на следующий день типируют повторно, используя разведения фагов, соответствующие 100 ТР (разведение 1:10) в нашем опыте.

Учет и регистрация результатов Штамм считается типируемым, если хотя бы один фаг вызвал силь­ную реакцию при типировании I ТР или 100 ТР. (Продолжение см.стр.138)

Б. Бактериологический.

Материал: гной из мочеполовых органов, конъюктивы глаза, синовиальная жидкость, кровь.

Рис. 8 СХЕМА

В. Серологический – РСК

Методы микробиологической диагностики менингококковых инфекций.

А. Бактериоскопический

Б. Бактериологический

Материал: спинномозговая жидкость, кровь, экссудат, гной, слизь из зева и носоглотки

Рис. 9 СХЕМА

В. Иммунологический метод диагностики менингококковых заболеваний

Для диагностики менингококковых инфекций помимо классического бактериологического способа используют также различные серологиче­ские реакции, позволяющие обнаружить антигены возбудителя в спинно­мозговой жидкости и в крови. С этой целью применяют реакции коагглютинации, латекс-агглютинации, встречного иммуноэлектрофореза, реакцию пассивной гемагглютинации и эритроиммуноадсорбцию. Последний метод предложен, в частности, для обнаружения полисахаридного антигена серогруппы А (наиболее частого возбудителя менингита). Суть метода за­ключается в том, что луночки полистиролового планшета сенси­билизируют противоменингококковыми антителами, затем в них добав­ляют исследуемый материал, содержащий искомый антиген. Смесь инкубируют при 37⁰ в течение 30-60 мин для связывания антигена антителами. После отмывания в луночки добавляют эритроцитарный диагностикум (эритроциты, несущие антитела к менингококку группы А). В качестве положительного контроля в одну из луночек добавляют полисахарид группы А, отрицательного - эритроциты без антител. Реакцию учитыва­ют через 20 мин седиментации при 22⁰ визуально и оценивают по 4-х крестной системе. В случае положительной реакции комплекс антитело-антиген взаимодействует с сенсибилизированными эритроцитами, в ре­зультате образуется гомогенный слой эритроцитов, фиксированных на стенках луночек. При отрицательной реакции эритроциты скатываются на дно, образуя компактный осадок.

Методы микробиологической диагностики пневмококковых инфекций.

Поиск по сайту: