Методические указания. § 3. Метод микроскопии в темном поле

§ 3. Метод микроскопии в темном поле.

При микроскопии по методу темного поля препарат освещается сбоку косыми пучками лучей, не попадающими в объектив. В объектив микроскопа попадают лишь лучи, отклоненные частицами препарата в результате отражения, преломления или дифракции. В силу этого мик­робные клетки и другие частицы представляются ярко светящимися на черном фоне.

Для микроскопии в темном поле используется специальный кон­денсор и обычные объективы. Так как апертура иммерсионного объек­тива больше чем апертура конденсора темного поля, внутрь иммерсион­ного объектива вставляется специальная трубчатая диафрагма, снижающая его апертуру.

Свет от осветителя направляют на плоское зеркало микроскопа. Удаляют конденсор, вывинчивают объектив и вынимают окуляр. На ту­бус микроскопа кладут матовое стекло и, поворачивая зеркало, доби­ваются равномерной освещенности матового стекла. После этого, не меняя положения зеркала и осветителя, вставляют конденсор темного поля и окуляр.

Препарат для микроскопии готовят по типу "раздавленной капли" на возможно более тонком предметном стекле (не толще 1,1 мм). На поверхность конденсора наносят каплю иммерсионной жидкости (воды; глицерина, кедрового масла), препарат кладут на столик микроскопа и конденсор поднимают до соприкосновения с предметным стеклом.

Поворотом револьвера устанавливают слабый сухой объектив и фокусируют его на препарат. При этом в поле зрения видны либо круглое освещенное пятно, либо освещенное кольцо с темным центром. Вращением центрировочных винтов конденсора устанавливают этот освещенный участок точно в центре поля зрения. Осторожно опускают конденсор. Если при этом диаметр светлого кольца уменьшается, конденсор опускают до тех пор, пока темный участок в центре исчезнет и кольцо превратится в небольшой светлый диск. Если же при опуска­нии конденсора диаметр светлого кольца не уменьшается, а, наоборот, увеличится, необходимо поднять конденсор. Если, при максимальном подъеме конденсора кольцо все же не исчезает и его центральный участок остается темным, это указывает на слишком большую толщину предметного стекла. В этом случае необходимо приготовить новый препарат на более тонком стекле.

Поставив конденсор на необходимую высоту и еще раз уточнив его центрировку с помощью регулировочных винтов, включают поворотом револьвера сильный сухой или иммерсионный объектив и приступают к наблюдению.

§ 4. С помощью прокаленного и остуженного скальпеля отрезают небольшой кусочек культуры актиномицета на плотной питательной среде и помещают его в каплю воды на предметном стекле. Каплю накрывают вторым чистым предметным стеклом. Стекла плотно придавливают друг к другу, растягивают и таким образом получают два мазка, которые высушивают, фиксируют обычным способом и окрашивают водным фуксином.

При микроскопии обратить внимание на сплетение тонких нитей, истинное ветвление их и большое количество свободно лежащих эктоспор - конидий.

В гистологическом срезе из органа при актиномикозе центральная часть друзы актиномицета представляет сплетение тонких нитей, окрашенных в темно-фиолетовый цвет. Отходящие на периферию концевые нити образуют колбовидные вздутия, окрашенные в розовый цвет.

§ 5. В каплю вода на предметном стекле вносят небольшую частицу гриба и накрывают покровным стеклом. При микроскопии со слабой и сильной сухими системами обратить внимание на строение мицелия и органов плодоношения. Мицелий у мукора одноклеточный, несептированный, а у аспергилла и пеницилла - многоклеточный. Органы плодоношения: большой спорангиеносец с эндоспорами у мукора; конидиеносцы несептированные в виде лейки у аспергилла, септированные в виде кисти рук у пеницилла.

§ 6. В препарате-мазке, окрашенном метиленовым синим, обратить внимание на форму дрожжевых клеток, наличие почковидных выпячиваний, а также на внутреннее строение клеток.

§ 7. Дрожжеподобные грибы рода кандида являются одноклеточными микроорганизмами. Диаметр клеток варьирует в пределах 2-15 микронов. Клетки дрожжёподобных грибов одеты отчетливо заметной оболочкой, имеют цитоплазму, компактное ядро, вакуоли и разнообразные включения. Почкование является единственной формой размножения этих грибов. Форма почек округлая или слегка грушевидная.

Наружных спор, типа конидий, и внутренних типа аскоспор, дрожжеподобные грибы не образуют, чем и отличаются от истинных дрожжей, аскомицетов и конидиальных организмов. Некоторые виды кандида образуют хламидоспоры, диаметр их достигает 10-20 микронов, форма округлая, оболочка толстая, двуконтурная. Хламидоспоры возникают на концах псевдомицелия из укрупненных клеток, называемых протохламидоспорами.

Настоящего мицелия дрожжеподобные грибы также не имеют. Образование нитей (филаментация) происходит за счет удлинения клеток и расположения их в длинные цепочки. Такие нити называются псевдомицелием и отличаются от истинного мицелия тем, что не имеют общей оболочки и перегородок, а состоят из длинных клеток, образующихся путем последовательного бокового или концевого почкования.

§ 9. В препаратах из крови больных трехдневной малярией найти различные стадии развития малярийного плазмодия: молодые шизонты кольцевидной формы с вакуолью в центре; зрелые шизонты неправильной амебовидной формы без вакуоли; делящиеся шизонты - в стадии меруляции; макфо- и микрогаметоциты правильной овальной формы. Обратить внимание на форму и размеры эритроцитов. Препараты зари­совать.

§ 10. Токсоплазмы имеют форму полумесяца или напоминают доль­ки апельсина. Один конец токсоплазмы заострен, а другой - закруглен. Размеры их следующие: длина 4-7 микронов, ширина - 2-4 микрона. При окраске по методу Романовского цитоплазма токсоплазм окрашивается в голубой цвет; ядро, имеющее вид скопления гранул и сети, - в рубиново-красный цвет. Ядро располагается, как правило, в центре паразита, занимая около 1/4 части его тела.

Контрольные вопросы

Какое место занимают спирохеты в системе микроорганизмов?

Дайте классификацию спирохет.

Какое строение имеют спирохеты?

Какие метода микроскопии применяются для изучения морфологии спирохет?

Какой принцип микроскопии в темном поле?

Какое место занимают актиномицеты в системе микроорганизмов?

Как устроена друза актиномицета?

Каковы особенности морфологии актиномицетов?

Что такое спорангий, гифы, мицелий, конидии?

чем отличаются мицелий и органы плодоношения мукоровых, аспергилловых и пеницилловых плесеней?

Чем отличаются споры грибов от спор бактерий?

Каковы строение и способы размножения дрожжей?

Каковы морфологические отличия дрожжеподобных грибов от дрожжей?

Что такое аски?

Почему дрожжеподобные грибы относятся к категории несовершенных грибов?

Какие грибы используются как продуценты антибиотиков?

Какова роль дрожжевых и дрожжеподобных грибов в медицине и промышленности?

Что такое хламидоспоры? Псевдомицелий?

У каких грибов имеет место их образование?

Дайте классификацию простейших.

Назовите патогенных представителей из каждого класса простей­ших..

Какое строение имеют трипаносомы?

Что такое блефаробласт, ундулирующая мембрана?

Какое строение имеют лейшманин?

Чем отличается лептомонадная форма лейшманий от лейшманиальной?

Какова классификация возбудителей малярии?

Какие отличительные признаки имеет комар - переносчик возбудители малярии?

Какие циклы развития имеет малярийный плазмодий?

Как и где протекает спорогония?

Как и где протекает шизогония?

Какова морфологии молодых и зрелых шизонтов, микро- и макро-гаметоцитов и стадии меруляции у возбудителя 3-х дневной малярии?

Каковы отличительные особенности возбудителей 4-дневной и тропической малярии?

Как изменяются эритроциты при различных формах малярии?

Какое строение имеет токсоплазма?

Рис.1 Боррелия возвратного тифа (мазок крови, окраска по Романовскому)

Рис.2 Бледная спирохета (мазок из чистой культуры, окраска по Романовскому)

Рис.3 Лептоспира (темное поле)

Рис.4 Актиномицет

Рис.5 Друза актиномицета

Рис.6 Нитчатый гриб мукор

Рис.7 Нитчатый гриб аспергилл

Рис.8 Нитчатый гриб пеницилл

Рис.9 Дрожжи

Рис.10 Дрожжеподобные грибы кандида

Рис.11 Трипаносома (мазок крови, окраска по Романовскому)

Рис.12 Лейшмании в чистой культуре (лептомонадная форма, окраска по Романовскому).

Рис.13 Лейшмании в организме больного (лейшманиальная форма, окраска по Романовскому)

Рис.14 Токсоплазма

Рис.15 Амеба

Рис.16 Малярийные плазмодии (окраска по Романовскому) Молодой шизонт (3-дневная; тропическая)

Рис.17 Малярийные плазмодии (окраска по Романовскому) Зрелый шизонт (3-дневная; 4-дневная)

Рис.18 Стадия меруляции (4-дневная; тропическая)

Рис.19 Гаметоцит (3-дневная; 4-дневная)

Рис. 20 Гаметоцит возбудителя тропической малярии

Поиск по сайту: