Задача. № 4 Иллюстрация эксперимента

Схема эксперимента:

а — мышь, которой введена культура патогенного капсулированного штамма S пневмококов, погибает;

б — мышь, которой введена культура непатогенного бескапсульного R—мутанта нормального S—штамма, не погибает;

в — мышь, которой введена культура S—штамма, убитого предварительно нагреванием, не погибает;

Г — мышь, которой введена смесь живой культуры R—мутанта и убитой нагреванием культуры непатогенного S—штамма, погибает; в этом случае присутствие убитых нагреванием S—бактерий вызвало??? живых R—бактерий.

1. Эксперимент какого ученого иллюстрирует приведенная схема?

2. Какой механизм генетической изменчивости открыт в приведенном эксперименте?

3. Какой результат получен в эксперименте с пневмококками?

Ответ:

1. Эксперимент Гриффитса;

2. Трансформация;

3. Восстановление способности к образованию капсулы, как ведущего фактора вирулентности и патогенность.

Автор: Подгрушная Т.С.

Задача 5. От 8 пациентов с клиническим диагнозом «Генитальный герпес» был забран патологический материал и проведено ПЦР-исследование – См. фото.

М 1 2 3 4 5 6 7 8 К^- К⁺

М – маркер молекулярной массы

1-8 – исследуемые образцы

К^- контроль заведомо отрицательный

К^{+ -} контроль заведомо положительный

1. Учтите и оцените полученные результаты.

2. Что являлось маркером возбудителя при проведении ПЦР?

3. Возможно ли получение ложноположительных и ложноотрицательных результатов? Если – да, то почему это возможно и как этого избежать.

Ответ:

1. Результаты достоверны. ПЦР положительная у обследуемых 1-4, т.к. при исследовании данных образцов были выявлены метки на уровне заведомоположительного контроля и обнаруженная ДНК по молекулярной массе соответствовала искомой ДНК вируса герпеса (результат сравнения с маркером молекулярной массы), следовательно генетически можно подтвердить диагноз у данных обследованных; ПЦР отрицательная у обследуемых 5-8, т.к. не выявлено меток, следовательно диагноз не подтвержден.

2. Маркером для ПЦР являлась ДНК вируса простого герпеса.

3. Получение ложноположительных результатов возможно в случае несоблюдения противоэпидемиологического режима в лаборатории и контаминации другими нуклеиновыми кислотами исследуемых образцов, либо использовании одних наконечников при проведении ПЦР. Получение ложноотрицательных результатов возможно в случае неполной очистки при получении ДНК из исследуемого образца вследствие присутствия ингибиторов ПЦР, либо утрате ДНК вследствие присутствия нуклеаз, либо неправильно подобранного праймера.

Автор: Хохлова О.Е.

Задача № 6.

Известно, что РНК вируса гриппа А фрагментарна и состоит из 8 сегментов, каждый из которых является моноцистронным геном. Вирион вируса состоит из 7 структурных белков, кроме этого в его составе имеются 3 неструктурных белка, принимающих участие в репликации вируса.

1. Объясните, как может достигаться эффект расширения генетической емкости РНК?

2. Как «дорабатываются» первичные транскрипты с целью приобретения структуры, привычной для мРНК эукариотической клетки?

Ответ:

1. Уникальный механизм – повторная трансляция одной и той же мРНК со сдвигом рамки считывания.

2. Присоединение к 5^/ - концу «шапочки» - cap -метилированных нуклеотидов и полиаденилирование 3^/ - конца.

Автор: Подгрушная Т.С.

Задача №7.

Гены «домашнего хозяйства» и продукты их экспрессии, используемые для молекулярной идентификации микроорганизмов.

1. Что такое гены «домашнего хозяйства»?

2. Приведите примеры генов «домашнего хозяйства», какие продукты образуются в результате их экспрессии?

Ответ:

1. Гены «домашнего хозяйства» (housekeeping genes) – это гены, которые экспрессируются на относительно постоянном уровне на всех стадиях жизненного цикла микроорганизма. Они обеспечивают процесс гликолиза, биосинтез аминокислот и нуклеотидов, катаболизм белков и т.п..

2. К числу генов «домашнего хозяйства» относятся:

· гексокина́за (АТФ-зависимая D-гексоза-6-фосфотрансфераза) — цитоплазматический фермент класса трансфераз, подкласса фосфотрансфераз, первый фермент пути гликолиза, осуществляющий фосфорилирование шестиуглеродных сахаров (гексоз) с использованием энергии АТФ.

· Например, бактериальный белок RecA - основной белок системы репарации двухцепочечных разрывов ДНК.

· Например, 7 основных генов S. aureus:

arc C (carbamate kinase)

aroE (shikimate dehydrogenase)

glpF (glycerol kinase)

gmk (guanilate kinase)

pta (phosphate acetyltransferase)

tpiA (triase phosphate isomerase)

ypiL (acetyl-CoA acetyl-transferase)

Авторы: Перьянова О.В., Хохлова О.Е.

Задача № 8.

В ГКБ поступил пациент с абсцессом правого бедра. В момент поступления был забран патологический материал и проведен бактериологический метод диагностики, выделены – S. aureus и S. epidermidis в количестве 10⁷ КОЕ/г. Через 5 суток пребывания в стационаре из раны был выделен MRSA.

1. В результате чего произошла смена возбудителя?

2. Назовите генотипические методы, позволяющие доказать вашу точку зрения.

3. Что является основой генотипирования с целью выявления источника и путей распространения?

Ответ:

1. Вследствие нахождения в стационаре произошло присоединение внутрибольничной инфекции, вызванной MRSA. Возможными источниками инфекции являлись – бактерионосители MRSA среди медицинского персонала, больные; возможными факторами передачи – руки, медицинский инструментарий, оборудование, предметы ухода и обихода вследствие нарушения санитарно-эпидемического режима.

2. Для генотипирования выделенных штаммов используются методы:

- плазмидный анализ;

- рестрикционный анализ хромосомной ДНК;

- пульс-электрофорез;

- изучение полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ-ПЦР);

- риботипирование;

- ПП-ПЦР;

- анализ нуклеотидной последовательности (секвенирование).

3. Основой генотипирования является то, что клонально родственные изоляты имеют определенную характеристику, или признаки, посредством которых они могут быть дифференцированы от неродственных изолятов. Для подтверждения данной точки зрения необходимо установить соответствие выделенных штаммов от больного и штаммов, выделенных от медицинского персонала и с объектов окружающей среды.

Автор: Хохлова О.Е.

Поиск по сайту: