Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции

Менингококки вызывают заболевание у человека в форме менингита, менингококкцемии и назофарингита. Клетки менингококка имеют слегка овоидную форму и напоминают кофейные зерна размером 0,6-1 мкм, располагающиеся попарно, имеют капсулу. Капсула утрачивается при пересеве на среды. Окрашиваются по Граму отрицательно.

Материалом для исследований может служить СМЖ (спинномозговая жидкость), кровь, носоглоточная слизь, соскоб из геморрагических элементов сыпи, секционный материал.

Как при взятии материала, так и при проведении исследований необходимо учитывать слабую жизнеспособность менингококков во внешней среде. Материал исследуют немедленно или не позднее 2-3 часов после взятия, выдерживая его при температуре 37°С. Носоглоточная слизь забирается специальным тампоном изогнутым на 2/3 длины под углом 45° из верхних отделов носоглотки не касаясь языка, зубов, слизистой оболочки щек. Материал следует брать натощак или через 3-4 часа после еды и до начала антибиотикотерапии. Ликвор берут путем пункции спинномозгового канала в количестве 2-5 мл и делят на 2 части: одну центрифугируют и исследуют осадок, к другой добавляют полужидкую питательную среду и выдерживают при 37°С для накопления бактерий.

Бактериоскопическое исследование. Мазки из осадка ликвора окрашивают по Граму или метиленовой синькой в течение 5 минут и микроскопируют. (Кровь и носоглоточная слизь бактериоскопическому исследованию не подлежит). При наличии гноя в большинстве случаев обнаруживаются типичные грамотрицательные диплококки, имеющие характерное расположение - внутри лейкоцитов, либо свободно, что позволяет сделать окончательное заключение о менингококковой инфекции. Аналогичным образом изучают мазки-отпечатки из оболочек мозга при исследовании секционного материала.

Обязательному бактериоскопическому исследованию подвергают материал из колоний менингококков на плотных питательных средах. В случае трудности дифференцировки с грамположительными кокками фиксированныемазки окрашивают по Граму в модификации Калины. Методика окраски: на обезжиренное стекло наносят каплю воды, в которой эмульгируется изучаемая культура. К капле микробной взвеси добавляют каплю 0,5% спиртового раствора бриллиантовой зелени, распределяют в виде мазка, высушивают на воздухе и фиксируют в пламени. На препарат наносят основной реактив на 1,5-2 минуты (0,5% спиртовый раствор йодистого калибя-96 мл и 5% спиртовый раствор йода-2 мл), затем краску смывают водой. Препарат промывают 30% спиртом до отхождения облачков краски, промывают водой и докрашивают раствором фуксина в течение 2 минут (основной фуксин Циля-1 мл и дистиллированной воды 9 мл). При микроскопии грамотрицательные микроорганизмы окрашиваются в розовый цвет, грамположительные - в зелено-черный.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на чашки с питательным агаром, содержащим кровь, сыворотку или асцитическую жидкость, для выделения чистой культуры с целью подавления роста грамположительных кокков в среды добавляют ристомицин. Для посева используют свежеприготовленные среды, подогретые в термостате до температуры 37°С. Образование колоний менингококков на этих средах наблюдается через 24-48 часов после инкубации посевов при 37°С. В отличие от колоний других кокков колонии менингококков прозрачны, имеют голубоватый оттенок, ровные края и величину с булавочную головку. Такие колонии пересевают в 2 пробирки со скошенным сывороточным агаром для накопления чистой культуры и в пробирку со скошенным простым МПА, что необходимо для дифференцировки нейссерий. Одну пробирку с сывороточным агаром и пробирку с простым МПА инкубируют при температуре 37°С, а вторую пробирку с сывороточным агаром при 22°С. Эти посевы помогают отличить менингококк от Neisseria catarrhalis, которая хорошо растет на простых средах при температуре 22°С и 37°С. Для чтобы установить принадлежность культуры к роду нейссерий необходимо провести пробу на оксидазу. Проба на оксидазу. Изучаемую культуру наносят петлей на поверхность фильтровальной бумаги, пропитанной 1% раствором тетраметилпарафенилендиамина След штриха сразу краснеет, если микроб принадлежит к роду нейссерий.) Грамотрицательные диплококки, дающие положительную реакцию на оксидазу, засевают на среды "пестрого" ряда с добавлением сыворотки. Менингококк ферментирует лактозу и мальтозу до кислоты.

Поиск по сайту: