Бактериологическое исследование. Инфицированным тампоном проводят посев на одну из рекомендуемых сред: кровяной теллуритовый агар, среда Клауберга–II

Инфицированным тампоном проводят посев на одну из рекомендуемых сред: кровяной теллуритовый агар, среда Клауберга–II, хинозольная среда Бучина, среда Тинсдаля (цистеин-теллурит-сывороточная среда). Посевы со сред обогащения производят петлей. Предварительно материал в среде обогащения инкубируют.

Чашки с засеянным материалом инкубируют в термостате и изучают через 24-48 часов. На средах с теллуритом калия хорошо различимы биовары. Биовар гравис - крупные серые шероховатые с радиальной исчерченностью колонии; биовар митис - мелкие черные блестящие выпуклые гемолитические колонии; биовар интермедиус имеет промежуточные признаки. На хинозольной среде колонии возбудителя дифтерии окрашиваются в синий цвет, а среда на месте образования колоний приобретает фиолетовый оттенок (следствие восстановления индикатора). На среде Тинсдаля формируются круглые, выпуклые, блестящие черные или темно-коричневые колонии, окруженные темно-коричневым ореолом, являющимся специфическим признаком роста и размножения дифтерийного микроба.

Изучив колонии микроорганизмов по внешним признакам и особенностям роста, отбирают из них 2-3 типичных. Для накопления чистой культуры из отобранных колоний микроорганизмы пересевают на скошенный сывороточный агар, а также готовят мазки, окрашивают их по методам Нейссера и по Леффлера. Оставшуюся часть колоний засевают на среду для определения токсигенности и среду для выявления цистиназной активности (проба Пизу). Поскольку на чашке первичного посева могут одновременно вырастать колонии токсигенных и нетоксигенных вариантов C.diphtheriae, рекомендуется в тесте на токсигенность испытывать максимальное число колоний (10-20), смешивая материал нескольких колоний в одну бляшку.

Через 24 часа инкубации при появлении специфических линий преципитации изучаемую культуру идентифицируют как токсигенную и выдают документированный ответ. В случае отсутствия токсигенности чашки инкубируют еще 24 часа. Накопленную на сывороточном агаре чистую культуру используют для определения ферментативной активности на средах Гисса с глюкозой, сахарозой, крахмалом и мочевиной (проба Закса).

На 4 день исследования учитывают сахаролитические свойства, уреазную активность (проба Закса), а также повторно (через 48 часов) изучают результат пробы на токсигенность. Проба Закса может быть положительной уже через 30 минут пребывания материала в термостате (при усвоении мочевины среда ощелачивается и за счет фенолового красного окрашивается в красный цвет).

При отсутствии специфических линий преципитации, но при положительном результате на цистиназу, глюкозу, отрицательном результате на уреазу и сахарозу культуру идентифицируют как нетоксигенные коринебактерии. Положительный тест с крахмалом свидетельствует о выделенном биоваре гравис.

Поиск по сайту: