АвтоАвтоматизацияАрхитектураАстрономияАудитБиологияБухгалтерияВоенное делоГенетикаГеографияГеологияГосударствоДомДругоеЖурналистика и СМИИзобретательствоИностранные языкиИнформатикаИскусствоИсторияКомпьютерыКулинарияКультураЛексикологияЛитератураЛогикаМаркетингМатематикаМашиностроениеМедицинаМенеджментМеталлы и СваркаМеханикаМузыкаНаселениеОбразованиеОхрана безопасности жизниОхрана ТрудаПедагогикаПолитикаПравоПриборостроениеПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРадиоРегилияСвязьСоциологияСпортСтандартизацияСтроительствоТехнологииТорговляТуризмФизикаФизиологияФилософияФинансыХимияХозяйствоЦеннообразованиеЧерчениеЭкологияЭконометрикаЭкономикаЭлектроникаЮриспунденкция

Бактериологическое исследование

Читайте также:
  1. II этап. Исследование спонтанного нистагма.
  2. а) Исследование непосредственного запечатления следов
  3. Аналитическое исследование финансово-хозяйственной деятельности предприятий базируется на определенных принципах.
  4. Б) бактеpиоскопическое исследование налета
  5. б) Исследование окрашенных препаратов.
  6. Бактериологическое исследование
  7. Бактериологическое исследование
  8. Бактериологическое исследование
  9. Бактериологическое исследование
  10. Бактериологическое исследование
  11. Бактериоскопическое исследование

Исследуемый материал засевают на селективные и неселективные питательные среды . Для выделения стрептококков групп А и В из смеси культур используют КМПА с неомицином, для выделения S. agalactiae - селективный бульон с налидиксовой кислотой и гентамицином, для выделения S.bovis - желчно-эскулиновый агар. Исследуемый материал обязательно засевается на 5 % кровяной агар, для приготовления которого используется кровь барана. Эта среда ингибирует рост Haemophilus haemolyticus, обладающего сходными с пиогенным стрептококком культуральными свойствами и являющегося постоянным обитателем "слизистой оболочки верхних дыхательных путей. В качестве среды обогащения используют бульон для стрептококков и среду для контроля стерильности (СКС). Культивирование стрептококков в условиях повышенной концентрации двуокиси углерода дает более пышный рост. Чашки с посевами помещают в эксикатор с плотно притертой крышкой или в анаэростат, на дно которых ставят зажженную свечу. Инкубирую посевы при температуре 37°С в течение 18-24 часов, изучают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. По характеру гемолиза на КМПА стрептококки делят на три группы: 1) негемолитические; 2) α-гемолитические, или зеленящие, образующие зеленоватую зону частичного гемолиза за счет образования метгемоглобина; 3). β-гемолитические, образующие вокруг колоний прозрачную зону полного гемолиза. Представители первой группы обладают слабой вирулентностью и в большинстве случаев не имеют практического значения. Зеленящие стрептококки вегетируют на слизистой оболочке полости рта (S.salivarius, S.mutans, S.oralis), являются возбудителями крупозной пневмонии (Streptococcus pneumoniae). Бета-гемолитические стрептококки чаще всего являются источником заболеваний. Они вызывают скарлатину, рожистое воспаление, ангину, эндокардит, менингит, гнойно-воспалительные заболевания кожи, подкожной клетчатки, сепсис и постстрептококковые заболевания (ревматизм, гломеролонефрит).

Из подозрительных в отношении стрептококков колоний готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для первых генераций стрептококков часто характерен полиморфизм: наряду с типичными шаровидными клетками встречаются вытянутые в длину кокки разной величины, распологающиеся парами, короткими цепочками и скоплениями неправильной формы.



На жидких питательных средах рост различных стрептококков имеет свои особенности. Для пиогенного стрептококка характерен придонно-пристеночный рост с образованием мелкозернистого осадка и сохранением полной прозрачности среды. Пневмококки дают придонный рост в виде пушистого рыхлого осадка с сохранением полной прозрачности или равномерным более или менее интенсивным помутнением бульона. S.pyogenes, S.bovis, S.agalactiae могут вызывать интенсивное помутнение бульона с образованием небольшого гомогенного осадка. В мазках приготовленных с жидкой среды стрептококки располагаются обычно в виде длинных цепочек (7-8 и более кокков). Для получения чистой культуры выросшие изолированные колонии пересевают на КМПА. колоний. Из флаконов с посевами крови делают высев на КМПА на вторые, четвертые девятые сутки для получения изолированных колоний.

Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по биохимическим, антигенным свойствам, чувствительности к антимикробным средствам.

Проба на каталазу. В каплю 3% раствора перекиси водорода на предметном стекле вносят с помощью стеклянной палочки изучаемую культуру. Положительный результат оценивается по выделению пузырьков газа. Стрептококки каталазной активностью не обладают.

Проба с бацитрацином и сульфаниламидами. Диски с названными препаратами, помещают на чашки с засеянной сплошным газоном культурой, инкубируют 18-24 часа в аэробных условиях. Большинство штаммов S.pyogenes (99%) чувствительны к бацитрацину, стрептококки групп С и G чувствительны к смеси сульфаметоксазола и триметоприма.

Гидролиз гиппурата натрия. В 0,4 мл 1% водного раствора гиппурата натрия вносят петлю чистой культуры, материал инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 2 часов. Затем добавляют 0,2 мл 3,5% раствора нингидрина в смеси бутанола и ацетона (1:1). Через 10 минут после повторной инкубации появляется пурпурное окрашивание. Этот тест основан на способности стрептококков группы В вызывать гидролиз гиппурата натрия.

Желчно - эскулиновый тест необходим для идентификации стрептококков группы Д (S.bovis), которые растут на желчно-эскулиновом агаре с образованием комплекса темно-коричневого или черного цвета. Исследуемую культуру засевают на агар, содержащий 40% желчи, 0,1%эскулина и 0,05% цитрата железа. Результат учитывается через 24-48 часов инкубации при температуре 37°С.

Рост в бульоне с 6,5% раствором NaCl. Стрептококки группыВ, в отличие от других стрептококков, устойчивы к высокой концентрации NaCl. Результат учитывается через 24-48 часов инкубации при температуре 37°С.

Тест лизиса желчью. 10% раствор желчи лизирует молодую культуру пневмококка. При лизисе в опытной пробирке отмечается просветление. (В контрольной пробирке с сывороточным бульоном пневмококк дает придонный рост в виде пушистого рыхлого осадка)

Оптохиновый тест. От зеленящих стрептококков пневмококки отличаются высокой чувствительностью к оптохину. Рост пневмококка ингибируется оптохином в концентрации не более 5 мкг/мл. Зона ингибирования роста пневмококка вокруг диска с оптохином значительно превышает зону задержки роста прочих стрептококков.

Антигенная дифференциация стрептококков. В настоящее время по антигенному составу полисахарида клеточной стенки (субстанция С) стрептококки разделяют на 20 серологических групп, обозначаемых заглавными буквами латинского алфавита от А до V. Выпускаемые в настоящее время диагностикумы обеспечивают идентификацию стрептококков групп А, В, С, F, G по реакции преципитации. Внутри серогрупп стрептококки разделяют на серовары по специфичности белковых антигенов М, Р и Т, которые выявляются в реакции агглютинации. Серовары обозначаются цифрами. Большинство возбудителей различных стрептококковых инфекций относится к серогруппе А. Антигенную структуру пневмококков изучают в реакции агглютинации на стекле или в реакции Нейффельда с использованием набора сывороток к капсульным полисахаридам.

Иммунологическая диагностика стрептококковых заболеваний нашла признание при подтверждении диагноза ревматизма и направлена на определение титра антител к стрептолизину, гиалуронидазе, стрептокиназе в парных сыворотках по реакции нейтрализации ферментов.


1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 |


Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Студалл.Орг (0.006 сек.)