Бактериологическое исследование

Исследуемый материал засевают на селективные и неселективные питательные среды. Для выделения стрептококков групп А и В из смеси культур используют КМПА с неомицином, для выделения S. agalactiae - селективный бульон с налидиксовой кислотой и гентамицином, для выделения S.bovis - желчно-эскулиновый агар. Исследуемый материал обязательно засевается на 5 % кровяной агар, для приготовления которого используется кровь барана. Эта среда ингибирует рост Haemophilus haemolyticus, обладающего сходными с пиогенным стрептококком культуральными свойствами и являющегося постоянным обитателем "слизистой оболочки верхних дыхательных путей. В качестве среды обогащения используют бульон для стрептококков и среду для контроля стерильности (СКС). Культивирование стрептококков в условиях повышенной концентрации двуокиси углерода дает более пышный рост. Чашки с посевами помещают в эксикатор с плотно притертой крышкой или в анаэростат, на дно которых ставят зажженную свечу. Инкубирую посевы при температуре 37°С в течение 18-24 часов, изучают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. По характеру гемолиза на КМПА стрептококки делят на три группы: 1) негемолитические; 2) α-гемолитические, или зеленящие, образующие зеленоватую зону частичного гемолиза за счет образования метгемоглобина; 3). β-гемолитические, образующие вокруг колоний прозрачную зону полного гемолиза. Представители первой группы обладают слабой вирулентностью и в большинстве случаев не имеют практического значения. Зеленящие стрептококки вегетируют на слизистой оболочке полости рта (S.salivarius, S.mutans, S.oralis), являются возбудителями крупозной пневмонии (Streptococcus pneumoniae). Бета-гемолитические стрептококки чаще всего являются источником заболеваний. Они вызывают скарлатину, рожистое воспаление, ангину, эндокардит, менингит, гнойно-воспалительные заболевания кожи, подкожной клетчатки, сепсис и постстрептококковые заболевания (ревматизм, гломеролонефрит).

Из подозрительных в отношении стрептококков колоний готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для первых генераций стрептококков часто характерен полиморфизм: наряду с типичными шаровидными клетками встречаются вытянутые в длину кокки разной величины, распологающиеся парами, короткими цепочками и скоплениями неправильной формы.

На жидких питательных средах рост различных стрептококков имеет свои особенности. Для пиогенного стрептококка характерен придонно-пристеночный рост с образованием мелкозернистого осадка и сохранением полной прозрачности среды. Пневмококки дают придонный рост в виде пушистого рыхлого осадка с сохранением полной прозрачности или равномерным более или менее интенсивным помутнением бульона. S.pyogenes, S.bovis, S.agalactiae могут вызывать интенсивное помутнение бульона с образованием небольшого гомогенного осадка. В мазках приготовленных с жидкой среды стрептококки располагаются обычно в виде длинных цепочек (7-8 и более кокков). Для получения чистой культуры выросшие изолированные колонии пересевают на КМПА. колоний. Из флаконов с посевами крови делают высев на КМПА на вторые, четвертые девятые сутки для получения изолированных колоний.

Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по биохимическим, антигенным свойствам, чувствительности к антимикробным средствам.

Проба на каталазу. В каплю 3% раствора перекиси водорода на предметном стекле вносят с помощью стеклянной палочки изучаемую культуру. Положительный результат оценивается по выделению пузырьков газа. Стрептококки каталазной активностью не обладают.

Проба с бацитрацином и сульфаниламидами. Диски с названными препаратами, помещают на чашки с засеянной сплошным газоном культурой, инкубируют 18-24 часа в аэробных условиях. Большинство штаммов S.pyogenes (99%) чувствительны к бацитрацину, стрептококки групп С и G чувствительны к смеси сульфаметоксазола и триметоприма.

Гидролиз гиппурата натрия. В 0,4 мл 1% водного раствора гиппурата натрия вносят петлю чистой культуры, материал инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 2 часов. Затем добавляют 0,2 мл 3,5% раствора нингидрина в смеси бутанола и ацетона (1:1). Через 10 минут после повторной инкубации появляется пурпурное окрашивание. Этот тест основан на способности стрептококков группы В вызывать гидролиз гиппурата натрия.

Желчно - эскулиновый тест необходим для идентификации стрептококков группы Д (S.bovis), которые растут на желчно-эскулиновом агаре с образованием комплекса темно-коричневого или черного цвета. Исследуемую культуру засевают на агар, содержащий 40% желчи, 0,1%эскулина и 0,05% цитрата железа. Результат учитывается через 24-48 часов инкубации при температуре 37°С.

Рост в бульоне с 6,5% раствором NaCl. Стрептококки группы В, в отличие от других стрептококков, устойчивы к высокой концентрации NaCl. Результат учитывается через 24-48 часов инкубации при температуре 37°С.

Тест лизиса желчью. 10% раствор желчи лизирует молодую культуру пневмококка. При лизисе в опытной пробирке отмечается просветление. (В контрольной пробирке с сывороточным бульоном пневмококк дает придонный рост в виде пушистого рыхлого осадка)

Оптохиновый тест. От зеленящих стрептококков пневмококки отличаются высокой чувствительностью к оптохину. Рост пневмококка ингибируется оптохином в концентрации не более 5 мкг/мл. Зона ингибирования роста пневмококка вокруг диска с оптохином значительно превышает зону задержки роста прочих стрептококков.

Антигенная дифференциация стрептококков. В настоящее время по антигенному составу полисахарида клеточной стенки (субстанция С) стрептококки разделяют на 20 серологических групп, обозначаемых заглавными буквами латинского алфавита от А до V. Выпускаемые в настоящее время диагностикумы обеспечивают идентификацию стрептококков групп А, В, С, F, G по реакции преципитации. Внутри серогрупп стрептококки разделяют на серовары по специфичности белковых антигенов М, Р и Т, которые выявляются в реакции агглютинации. Серовары обозначаются цифрами. Большинство возбудителей различных стрептококковых инфекций относится к серогруппе А. Антигенную структуру пневмококков изучают в реакции агглютинации на стекле или в реакции Нейффельда с использованием набора сывороток к капсульным полисахаридам.

Иммунологическая диагностика стрептококковых заболеваний нашла признание при подтверждении диагноза ревматизма и направлена на определение титра антител к стрептолизину, гиалуронидазе, стрептокиназе в парных сыворотках по реакции нейтрализации ферментов.

Поиск по сайту: