Микробиологическая диагностика коклюша

Bordetella pertussis –мелкая овоидная грамотрицательная палочка с закругленными концами длиной 0,5-1,2 мкм, образующая микрокапсулу, неподвижная, спор не образующая, является строгим аэробом, очень требовательна к питательным средам, растет в виде колоний похожих на капельки ртути на среде Борде-Жангу (картофельно-глицериновый агар с добавлением крови), и в виде серовато-кремовых колоний на казеиново-угольном агаре (КУА), биохимически инертна.

Забор материала производится стерильным тампоном из носоглотки больного, либо методом кашлевых пластинок. Для взятия материала у маленьких детей тампон, приготовленный на тонкой эластичной проволоке, вводят через нос. При немедленном посеве можно использовать сухой тампон, при отсутствии такой возможности тампон смачивают в алгинате кальция или в 0.9% растворе NaCl (сухая вата тормозит рост Bordetella pertussis).Тампон вводят в задние отделы ротовой полости, избегая контаминации со слизистой щек, языка, миндалин (для чего используют шпатель), и проводят 2-3 раза по задней стенке глотки. Материал необходимо доставить в лабораторию в течение 2-4 часов.

Лучше всего получать материал во время приступов кашля методом «кашлевых пластинок» (открытую чашку Петри с питательной средой держат перед кашляющим пациентом в течение 6-8 кашлевых толчков).

Бактериоскопический метод. Тампоном делают два мазка, высушивают их на воздухе и фиксируют жаром. Один мазок обрабатывают иммунной флюоресцирующей противококлюшной сывороткой, другой - паракоклюшной сывороткой. Препараты микроскопируют в люминесцентном микроскопе; просматривают не менее 50 полей зрения. Обнаружение темных клеток с четким светящимся венчиком свидетельствует о наличии в исследуемом материале B. pertussis.

Бактериологический метод. Исследуемый материал с тампона втирают на твердые питательные среды (Борде-Жангу, КУА, молочно-кровяной агар), в которые добавлен пенициллин. Для получения изолированных колоний материал втирают по периферии чашки в 4-5 площадок, затем сеют по центру Z-образным штрихом.

Исследование проводят в течение 5-6 суток. Колонии Bordetella pertussis (возбудителя коклюша) могут появиться через 48-72 часа культивирования. Через 24-72 часа появляются колонии Bordetella parapertussis. B.pertussis образуют мелкие колонии диаметром около 1 мм выпуклые влажные блестящие. (На КУА колонии имеют серовато-кремовый цвет, а на среде Борде-Жангу приобретают жемчужный или ртутный блеск). B.parapertussis образуют более крупные колонии.(На среде Борде-Жангу и молочно-кровяном агаре они образуют ограниченную зону гемолиза). Материал из характерных колоний забирается для реакции агглютинации на стекле с коклюшной и паракоклюшной сыворотками. Далее матерал накапливается на скошенном агаре для последующих исследований. Следует помнить, что в отличие от других бордетелл B.pertussis не растет на простом питательном агаре и не изменяет цвета специальных питательных сред.

Для определения уреазной активности в пробирки вносят 0,3 мл 2% раствора мочевины, 0,3 мл густой суспензии испытуемой культуры и 2-3 капли 0,1% спиртового раствора фенолфталеина (положительная реакция проявляется малиновым окрашиванием через 20-30 минут).

Серологическую идентификацию бордетелл проводят в реакции агглютинации с адсорбированными факторными сыворотками (антиген-7 является родовым, антиген –1 присущ только B.pertussis, 14- B.parapertussis и 12- B.bronchiseptica).

Серологическая диагностика применяется в основном для ретроспективного подтверждения диагноза и дифференциальной диагностики атипичных форм коклюша. Для этой цели может быть проведена РСК и РА. Реакция агглютинации проводится на 3-4 неделе заболевания (в условиях массовой вакцинации детей против коклюша диагностическое значение имеет нарастание титра антител в динамике болезни, поэтому реакцию ставят повторно через 4-5 дней).

При проведении эпидемиологических обследований можно применить метод кожных проб с введением 10 ЕД /0,1 мл агглютиногена.

Поиск по сайту: