ЛПНП холестерин

· менее 100 мг / дл: нормальный показатель для людей с сердечными заболеваниями

· Менее 130 мг / дл: нормальный показатель для людей, не имеющих сердечных заболеваний

· От 130 до 159 мг / дл: максимально допустимый уровень, высокий риск возникновения сердечно-сосудистых заболеваний

· 160 мг / дл или выше: очень высокий риск возникновения сердечно-сосудистых заболеваний

Еще одна норма

Норма холестерина в крови у женщин Общий холестерин: норма у женщин – от 3,6 до 5,2 ммоль/л, повышенным считается от 6,5 ммоль/л. Холестерин ЛПНП: норма 3,5 ммоль/л, высоким считается более 4,0 ммоль/л. Холестерин ЛПВП: норма от 0,9 до 1,9 ммоль/л, при уровне менее 0,78 вероятность развития атеросклероза повышается в три раза. Норма холестерина у мужчин Холестерин общий: норма у мужчин такая же, как и у женщин. Норма «плохого» холестерина у мужчин отличается: 2,25 – 4,82 ммоль/л. ЛПВП холестерин в крови у мужчин: норма от 0,7 до 1,7 ммоль/л. Также важную роль в оценке состояния липидного обмена играют триглицериды, их норма для мужчин и женщин примерно одинакова: Норма триглицеридов у женщин и мужчин: менее 200 мг/дл. Максимальная, но допустимая норма: 200 — 400 мг/дл. Высокий уровень триглицеридов: 400 — 1000 мг/дл. Очень высокий: Свыше 1000 мг/дл. Следует иметь в виду, что методики и тесты для определения биохимических показателей в различных медицинских лабораториях могут различаться: Общий холестерин: норма у мужчин и женщин 3,0 — 6,0 ммоль/л ЛПНП у женщин: норма 1,92 — 4, 51 ммоль/л, у мужчин 2,25 — 4,82 ммоль/л ЛПВП у женщин: норма 0,86 — 2,28 ммоль/л.у мужчин 0,7 — 1,73 ммоль/л.

Процесс перекисного окисления липидов

является универсальным процессом, протекающим в каждой клетке живого организма. Известно, что продукты перекисногоокисления липидов участвуют в регулировании проницаемости мембран, в регуляции скорости роста организмов и пролиферации клеток, а также в регулировании состава липидов мембран. Некоторое количество перекисей оказалось необходимым для функционирования АТФазы в митохондриях и т.д.

Увеличение концентрации продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) рассматривается как универсальный механизм повреждения клетки при различных патологических состояниях. В частности, в патогенезе атеросклероза одним из важных звеньев также являетсяперекисное окисление липидов. Было показано, что по мере прогрессирования заболевания, наряду со значительными нарушениями метаболизма липидов, возрастает содержание липоперекисей в сыворотке крови, а антиокислительная активность уменьшается, что свидетельствует о снижении в организме содержания антиоксидантов.

В настоящее время в клинике используется небольшое количество синтетических антио ксидантн ых препаратов, которыми являются витамин Е (а-токоферол), дибунол, предуктал. Четыре года назад Иркутским институтом органической химии СО РАН был синтезирован еще один антиоксидантный препарат «Диквертан» (ВФС 42-2397-94 от 29 июля 1996 г.). Этот препарат действует как ловушка для свободных радикалов, разрушая образование радикальных цепей. Витамин Е, по всей видимости, является первым эшелоном защиты клеточных и субклеточных мембранных фосфолипидов от перекисного окисления. Фосфолипиды митохондрий, эндоплазматического ретикулума и плазматических мембран обладают специфическим сродством к а-токоферолу, поэтому витамин, по-видимому, концентрируется в составе этих мембран. Токоферолы действуют как антиоксиданты, прерывающие цепи окисления благодаря их способности переносить фенольный водород на пероксидный радикал. Таким образом, действие витамина Е состоит, по-видимому, в предохранении клеточных и субклеточных компонентов от повреждения перекисями, обеспечивая целостность органелл и препятствуя тем самым развитию патологических состояний при действии физических, химических или других стрессорных факторов.

1. Методы исследования процессов перекисного окисления липидов.

Перекисное окисление мембранных фосфолипидов является одним из наиболее распространенных механизмов деструкции мембранных структур, регистрируется при развитии целого ряда патологических состояний. Тем не менее процессы перекисного окисления липидов протекают и в нормальной клетке. Они регулируются целым рядом ферментов: НАДФ(Н)-зависимыми микросомальными оксигеназами, циклооксигеназами и липоксигеназами. Продукты перекисного окисления липидов — предшественники синтеза простагландинов, тромбоксанов, простациклина, лейкотриенов и липоксинов. Современные представления о механизме перекисного окисления липидов свидетельствуют о возможности непосредственного присоединения молекулярного кислорода к органическим молекулам с образованием гидроперекисей. Субстратом окисления в биологических мембранах являются полиненасыщенные жирные кислоты, входящие в состав фосфолипидов. Перекисное окисление липидов — сложный процесс, протекающий как в животных, так и в растительных тканях. Он включает в себя активацию и деградацию липидных радикалов, встраивание в липиды предварительного активированного молекулярного кислорода, реорганизацию двойных связей в полиненасыщенных ацилах липидов и, как следствие, деструкцию мембранных липидов и самих биомембран. В результате развития свободнорадикальных реакций перекисного окисления липидов образуется целый ряд продуктов, в том числе спирты, кетоны, альдегиды, эфиры др. Так, например, только при окислении линолевой кислоты образуется около 20 продуктов ее распада. Биологические мембраны, особенно мембраны холоднокровных животных, содержат большое количество ненасыщенных жирных кислот, металлопротеины, активирующие молекулярный кислород. Поэтому неудивительно, что в них могут развиваться процессы перекисного окисления липидов.

Схематично процесс перекисного окисления липидов можно

представить следующим образом. Сначала образуется липидный радикал,

в результате чего формируются двойные сопряженные связи. Атака

молекулярного кислорода приводит к образованию перекисного радикала,

который может взаимодействовать с другой молекулой липида, разрушает

ее с образованием нового липидного радикала. Одним из продуктов этой 11

реакции является гидроперекись липида — сравнительно устойчивое

соединение. Кроме этого из перекисного радикала может образовываться

эндоперекисный радикал липида, распад которого приводит к фор-

мированию ряда продуктов, в том числе малонового диальдегида.

1.1. Спектрофотометрическое определение содержания

ацилгидроперекисей (диеновых конъюгатов) в плазме (сыворотке)

крови

Принцип метода основывается на установлении содержания

первичных продуктов ПОЛ в крови по поглощению липидным экстрактом

монохроматического светового потока в ультрафиолетовой области

спектра, так как молекулы с двумя сопряженными связями (диеновые

конъюгаты) обладают максимумом поглощения при 233 нм.

Реактивы:

1) н-Гептан; 2) смесь гептан: изопропанол (1:1 по объему); 3)

раствор НС1, рН 2,0 (0,1 н НС1 с рН 1,1 разводят водой 1:4).

Ход определения: К 0,2 мл плазмы добавляют 4 мл смеси гептан:

изопропанол (1:1) и встряхивают 10—15 мин на лабораторном

встряхивателе (или вручную, закрыв пробирку пробкой). Далее в про-

бирку добавляют 1 мл раствора НС1 (рН 2) и 2 мл гептана, интенсивно

встряхивают и после отстаивания и расслоения смеси на фазы (на что

уходит 20—25 мин) отбирают верхний, гептановый слой, который

используют для определения в нем ацилгидроперекисей по степени

светопоглощения при длине волны λ – 233 нм (А233).

В качестве контрольной пробы используют образец, содержащий

вместо плазмы 0,2 мл воды, подвергнутый всем вышеперечисленным

видам обработки.

Расчет содержания первичных продуктов перекисного окисления

липидов производят в относительных единицах по формуле:

А233 на 1 мл плазмы = А233

· VЭ: Vпл = (А233

·

4): 0,2 = А233

·

где А233 — значение оптической плотности опытной пробы при λ –233 нм,

VЭ = 4 мл — конечный объем гептанового экстракта (в мл),

Упл = 0,2 мл — объем взятой плазмы крови.

Расчет производится на: 1) 1 мл плазмы; 2) 1 мг липидов (для этого

дополнительно определяют общее содержание липидов

сульфофосфованилиновым методом).12

Примечание. При выполнении методики следует обратить

внимание на:

1) необходимость взятия крови натощак с использованием в

качестве антикоагулянта ЭДТА (1 мг/мл) — ингибитора свобод-

норадикального окисления;

2) осуществление встряхивания проб в стандартном режиме;

3) использование пробирок высотой 18—20 см, с ровными краями;

4) осуществление аккуратного отбора гептанового слоя: не

полностью, чтобы не захватить даже незначительный объем водной фазы.

1.2. Определение ацилгидроперекисей (диеновых конъюгатов) и

диенкетонов в плазме (сыворотке) крови модифицированным

методом Плацера с соавт.

Принцип метода тот же, что и в разделе 1.1.

Реактивы:

1) н-гептан;

2) смесь гептан: изопропанол (1:1 по объему).

Ход определения: в маленькую (объемом около 100 мл) кони-

ческую колбочку (колбу Эрленмейера) приливают 0,5 мл плазмы

(сыворотки) крови, 1,0 мл дистиллированной воды, 10,0 мл смеси гептан:

изопропанол. Содержимое колбочки встряхивают в течение 20 с и

оставляют на 10 мин. Затем его переносят в центрифужную пробирку и

центрифугируют в течение 10 мин при 1500—3000 об/мин. Верхний

гептановый слой отсасывают и определяют его абсорбцию на

спектрофотометре при длинах волн λ – 233 и 278 нм (для установления

содержания диеновых конъюгатов и диенкетонов соответственно). Одно-

временно учитывают абсорбцию контрольной пробы, которую выполняют

как опытную, с той лишь разницей, что вместо плазмы используют 0,5 мл

дистиллированной воды.

Для выражения полученного результата в единицах абсорбции на 1

мл плазмы (ед А/мл) из абсорбции опытной пробы вычитают таковую

контрольной и полученное значение умножают на 2.

Примечание.

1.В процессе фотометрии нулевое значение прибора устанавливают

по чистому гептану при длинах волн 233 и 278 нм соответственно.

2. Внесение смеси гептан: изопропанол, как и взятие гептановой

фазы, с последующим перенесением ее в пробирку удобно выполнять с

использованием системы шприц – пипетка, соединенных резиновой

трубкой и закрепленных на штативе. 13

1.3. Определение содержания вторичных продуктов ПОЛ (ТБК-

активных продуктов) в эритроцитах крови

Принцип метода. Об интенсивности процессов ПОЛ косвенно

можно судить по количеству ТБК-активных продуктов. Первичные

продукты ПОЛ (гидроперекиси липидов) нестойкие и довольно быстро

разрушаются с образованием вторичных продуктов ПОЛ: альдегидов,

кетонов, спиртов, эпоксидов. Среди них наиболее известен малоновый

диальдегид, составляющий основной компонент группы так называемых

ТБК-активных веществ: всех тех веществ в ткани, которые

взаимодействуют с тиобарбитуровой кислотой. Как правило, при

поступлении в организм ксенобиотиков, развитии патологических

процессов, при которых повышается перекисное окисление липидов

(ПОЛ), возрастает уровень ТБК-активных продуктов.

Этот тест является неспецифическим и основан на образовании

окрашенного комплекса при взаимодействии малонового диальдегида с

тиобарбитуровой кислотой.

Реактивы:

1) 17 % раствор трихлоруксусной кислоты (ТХУ);

2) 0,8 % раствор 2-тиобарбитуровой кислоты (ТБК);

3) 0,9 % (изотонический) раствор NaCl (0,15 моль/л).

Ход определения. Для исследования отбирают 0,1 мл эритроцитов,

трижды отмытых охлажденным изотоническим раствором NaCl, и

гемолизируют внесением в пробирку 2,0 мл дистиллированной воды. К

полученному гемолизату добавляют 1,0 мл 17 % раствора ТХУ и 1,0 мл

0,8 % раствора ТБК. Пробу прогревают в кипящей водяной бане в течение

10 мин, затем удаляют осадок белка центрифугированием в течение 10

мин при 3000 об/мин.

Интенсивность окраски измеряют при длине волны λ –540 нм

(желательно на спектрофотометре) в кювете с толщиной слоя 1 см. Для

проведения расчетов используют формулу:

Аоп · 106

· 4 (мл)

С (мкмоль/л) =-----------------------,

ε · 0,1 (мл)

где 4 мл – объем водной фазы, 0,1 мл – объем эритроцитарной массы,

– коэффициент перевода «моль/л» в «мкмоль/л»,

ε – коэффициент молярной экстинкции = 1,56 · 105

.14

1.4. Определение вторичных продуктов ПОЛ (ТБК-активных

продуктов) в тканях

Принцип метода тот же, что и в разделе 1.3.

Реактивы:

1) Na-фосфатный буфер (0,05 моль/л, pH 7,4);

2) 0,8 % раствор тиобарбитуровой кислоты (ТБК) (растворять при

помешивании, можно подогреть);

3) 30 % раствор ТХУ;

4) реактивы для определения белка биуретовым методом.

Ход работы: приготовить 10 % гомогенаты печени и почек на Na-

фосфатном буфере (pH 7,4) и профильтровать через 3-4 слоя марли.

Гомогенаты развести в 3-4 раза Na-фосфатным буфером, до конечной

концентрации белка 0,8-1мг/мл, (белок определить биуретовым методом).

К 1 мл разведенного гомогената добавить 1мл Na-фосфатного

буфера (pH 7,4), 0,5 мл 30 % раствора ТХУ, 2 мл 0,8 % раствора ТБК.

Пробы поместить на 15 мин в кипящую водную баню, выпавший в осадок

белок, отделить центрифугированием в течении 10 мин при 1500-3000

об/мин. (Следить, чтобы вода сильно не кипела и не произошло

выпаривания. Пробирки можно прикрыть фольгой).

Полученный супернатант спектрофотометрировать при длине волны

λ – 532 нм, против смеси реактивов (2 мл фосфатного буфера pH 7,4, 0,5

мл 30 % раствора ТХУ, 2 мл 0,8 % раствора ТБК).

По величине оптической плотности рассчитать содержание ТБК-

активных продуктов по формуле:

А

С = ——— (моль/мг белка),

ε · l ·n

где А – оптическая плотность λ = 532 нм,

Ε – коэффициент молярной экстинкции тиобарбитуровой кислоты,

ε = 1,56 · 105 моль-1

см-1

,

l – ширина кюветы (1см),

n – концентрация белка в пробе в мг (в 1 мл разведенного гомогената).

Поиск по сайту: