Хід виконання роботи. І. Отримання витягу пігментів

І. Отримання витягу пігментів

Ножицями нарізають 1 г листя і переносять у фарфорову ступку. До подрібненого листя додають трохи (на кінчику скальпеля) CaCO₃ для нейтралізації клітинного соку і розтирають до гомогенної маси. Потім поступово доливають 20 мл етилового спирту і продовжують розтирати доти, поки спирт не забарвиться в інтенсивний зелений колір. Одержану суміш фільтрують через складений фільтр у суху пробірку та використовують для подальших робіт. Для порівняння таке ж листя розтирають з водою. Порівнюють забарвлення гомогенатів.

ІІ. Розділення пігментів за методом Крауса

У пробірку наливають 2 мл спиртової витяжки пігментів, 3 мл петролейного ефіру або бензину, 2-3 краплі води для кращого розділення. Закривають пробірку корком, збовтують 2 хв і ставлять у штатив для розділення фаз. Спостерігають і зарисовують розподіл пігментів.

ІІІ. Омилення хлорофілу

До суміші пігментів додають грудочку NaOH, струшують. Проводять розділення за методом Крауса. Спостерігають за перерозподілом пігментів. Зарисовують результати спостереження. Сіль хлорофілінової кислоти зберігає зелене забарвлення й оптичні властивості хлорофілу, проте втрачає гідрофобні властивості. Тому при розділенні за методом Крауса вона з верхнього шару переміщується у нижній – спиртовий.

IV. Флуоресценція хлорофілу

Пробірку із спиртовим витягом хлорофілу розглядають проти світла на рівні очей. Вона має смарагдово-зелений колір. Потім пробірку розміщують на темному фоні і розглядають з того боку, з якого на неї падає світло. У відбитому світлі, внаслідок флуоресценції, спиртовий витяг матиме вишнево-червоний колір.

V. Оптичні властивості пігментів

Спектроскоп встановлюють так, щоб усі ділянки спектра мали однакову яскравість. При пропусканні білого світла через спиртовий витяг пігментів, нерозділений і розділений методом Крауса, виявляють спектри поглинання жовтих і зелених пігментів.

Зарисовують отримані спектри, звертають увагу на ширину кольорових смуг. Роблять висновок про спектри поглинання хлорофілів і каротиноїдів.

VI. Отримання феофітину та зворотне заміщення атома водню атомом металу

1. До 2-х мл спиртового витягу пігментів додають 2 краплі HCl, злегка збовтують і спостерігають зміну кольору витягу із зеленого до бурого.

2. Далі половину витягу переливають в іншу пробірку, до однієї додають кристалик оцтовокислої міді, до другої – оцтовокислого цинку. Обережно нагрівають на водяній бані. Спостерігають за відновленням зеленого кольору в обох пробірках.

VII. Роблять загальний висновок про досліджені фізико-хімічні властивості пігментів.

Поиск по сайту: