Окрашивание по Граму

Это универсальный дифференциально-диагностический метод окраски. Все бактерии по своему отношению к окраске этим способом делятся на две группы: грамположительные (грампозитивные) и грамотрицательные (грамнегативные). Техника окрашивания состоит в следующем. На обычно приготовленный и фиксированный мазок накладывают небольшой кусочек фильтровальной бумаги, заранее пропитанный раствором генцианвиолета (модификация А.В. Синева) и смачивают 2-3 каплями воды. Окраска продолжается в течение 2 минут. Фильтровальную бумагу с генцианвиолетом удаляют и на мазок наносят несколько капель раствора Люголя на 2 минуты (мазок чернеет). Сливают люголевский раствор и действуют 96°-ным спиртом 30 секунд. Промывают водой. Дополнительно окрашивают разведенным фуксином. Промывают водой, высушивают между листами фильтровальной бумаги и микроскопируют под иммерсионным объективом.

Микрокартина: грамположительные микроорганизмы окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные – в розовый (до красного). Шарообразные формы микроорганизмов в большинстве красятся по Граму положительно, извитые формы – отрицательно, палочковидные формы встречаются как грамположительные, так и грамотрицательные.

Для получения правильных результатов рекомендуется использовать суточные культуры микробов, применять свежеприготовленный раствор разведенного фуксина и проводить окрашивание параллельно с известными культурами микроорганизмов.

Механизм окраски по Граму объясняется физико-химическими особенностями строения цитоплазмы и клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий. У грамположительных содержится значительно больше рибонуклеиновой кислоты и белков в цитоплазме и пептидогликана в клеточной стенке. Поэтому при обработке препарата генцианвиолетом и раствором Люголя у грамположительных бактерий образуется более прочное соединение ионов йода и красителя.

При обработке спиртом грамположительные бактерии удерживают краситель, а грамотрицательные обесцвечиваются и окрашиваются дополнительно разведенным фуксином в розово-красный цвет.

Задания для самостоятельной работы

1. Приготовить препараты из чистых культур кишечной палочки, стафилококка и вакцинного штамма сибирской язвы, окрасить по Граму.

2. Микрокартину зарисовать, результаты работы внести в бланк экспертизы.

Вопросы для самоподготовки и контроля знаний

1. Бактерии по-разному окрашиваются по методу Грама (Грам + и

Грам –), потому что:

А. Имеют капсулу.

Б. Различаются по форме клеток.

В. Различаются по структуре и химическому составу

клеточной стенки.

Г. Имеют различный состав химический цитоплазмы.

2. Какими структурно-химическими особенностями обладает клеточная стенка грамположительных бактерий в отличие от грамотрицательных?

А. Содержит фосфолипиды.

Б. Содержит липопротеины.

В. Имеет пептидогликан до 90% и многочисленные извитые канальца.

3. Выберите правильную последовательность красок и реактивов, необходимых для окраски препарата по Граму:

А. Генцианвиолет, обесцвечивание спиртом, промывание водой, раствор Люголя, разведенный фуксин.

Б. Разведенный фуксин, раствор Люголя, генцианвиолет, обесцвечивание спиртом, промывание водой.

В. Генцианвиолет, раствор Люголя, обесцвечивание спиртом, промывание водой, разведенный фуксин.

Г. Обесцвечивание спиртом, промывание водой, раствор Люголя, генцианвиолет, разведенный фуксин.

4. При окраске препарата по Граму, приготовленного из известной культуры грамположительных бактерий, допущена одна неточность, в результате чего при микроскопии обнаружены бактерии, окрашенные в красный цвет. Найти вероятную причину неправильной окраски бактерий:

А. Длительная окраска генцианвиолетом.

Б. Длительное обесцвечивание спиртом.

В. Кратковременная окраска разведенным фуксином.

Г. Длительная обработка раствором Люголя.

5. При окраске препарата по Граму, приготовленного из известной культуры грамотрицательных бактерий, допущена одна неточность, в результате чего при микроскопии обнаружены бактерии, окрашенные в фиолетовый цвет. Найти вероятную причину неправильной окраски бактерий:

А. Длительная окраска генцианвиолетом.

Б. Кратковременное обесцвечивание спиртом.

В. Длительная окраска разведенным фуксином.

Г. Длительная обработка раствором Люголя.

6. 1. Грамположительные бактерии окрашиваются:

2. Грамотрицательные бактерии окрашиваются:

А. В красный цвет.

Б. В фиолетовый цвет.

7. К грамположительным бактериям относятся возбудители:

А. Стафилококкозов.

Б. Сальмонеллезов.

В. Столбняка.

Г. Бруцеллеза.

8. К грамотрицательным бактериям относятся возбудители:

А. Колибактериоза.

Б. Сибирской язвы.

В. Туберкулеза.

Г. Некробактериоза.

Поиск по сайту: