Определение протеолитических свойств

Наиболее часто для обнаружения протеолитических ферментов производят посев чистой культуры бактерий уколом в столбик мясо-пептонного желатина. Посевы выдерживают при комнатной температуре (20-22 °С) в течение нескольких дней, при этом регистрируют не только наличие разжижения, но и его характер.

Рис. 30. Проявление роста (А) и характер разжижения (Б) мясо-пептонного желатина различными бактериями: протеолитический фермент отсутствует: 1 – аэроб; 2 – анаэроб; 3 – факультативный анаэроб; протеолитический фермент в незначительном количестве: 4 – факультативный анаэроб; 5 – анаэроб; 6 – аэроб

Разжижение может быть послойное, что характерно для синегнойных бактерий, стафилококки – в виде «чулка». Характер разжижения желатина возбудителем сибирской язвы напоминает перевернутую елочку (рис. 30).

Протеолитическое действие микроорганизмов можно наблюдать при посевах на свернутую сыворотку крови, вокруг колоний появляются углубления и зоны разжижения.

В молоке наблюдается просветление или растворение образовавшегося вначале сгустка казеина, который расщепляется с образованием пептона, что придает молоку желтоватый цвет (пептонизация молока).

Показателями более глубокого расщепления белка являются его конечные продукты: индол, аммиак, сероводород и др. Для определения этих газообразных веществ производят посев чистой культуры бактерий в бульон или пептонную воду. В пробирки с засеянной средой между стенкой пробирки и пробкой помещают индикаторную бумагу (рис. 31). Посевы выращивают в термостате в течение 1 – 3 суток.

а) обнаружение индола производится несколькими методами. Наиболее прост и доступен способ Мореля. Узкие полоски фильтровальной бумаги смачивают горячим насыщенным раствором щавелевой кислоты (индикаторная бумага) и высушивают. При выделении индола на 1-3-й день нижняя часть полоски бумаги вследствие соединения индола с щавелевой кислотой приобретает розовый цвет.

б) обнаружение аммиака определяют по посинению розовой лакмусовой бумаги, помещенной в пробирку таким же образом, как и для определения индола.

Рис. 31. Определение протеолитических свойств бактерий: изменение цвета индикаторной бумаги при образовании сероводорода, аммиака, индола – до посева (А), положительная реакция (Б)

в) обнаружение сероводорода. В пробирку с посевом помещают индикаторную полоску фильтровальной бумаги, смоченную раствором уксуснокислого свинца. При взаимодействии сероводорода и уксуснокислого свинца бумага чернеет за счет образования сернистого свинца.

Поиск по сайту: