Методы количественного определения микробов в исследуемых объектах

Одним из способов определения общего микробного числа в исследуемых объектах является метод посева определенного объема или навески такого материала на плотные питательные среды. После культивирования посевов приступают к подсчету выросших колоний, по количеству которых судят о степени загрязненности исследуемых объектов.

Количественному учету подлежат все колонии, независимо от их величины, окраски, формы и т.п., принимая каждую колонию за одну бактериальную клетку.

В зависимости от количества выросших колоний при подсчете их поступают различно. Если их число при ориентировочной оценке не превышает 50, то прибегают к фронтальному (сплошному) подсчету. Для этого, повернув чашку вверх дном, при помощи лупы, считают все колонии, отмечая каждую сосчитанную колонию чернилами или восковым карандашом на дне чашки.

Для подсчета колоний при большом их количестве применяют метод выборочного подсчета, пользуясь специальными приемами.

1. Со стороны дна площадь чашки делят восковым карандашом на равное число секторов (на 4, или 6, или 8). Число колоний подсчитывают в одном из секторов. Полученное количество колоний умножают на число секторов. Таким образом вычисляют общее количество колоний, выросших на всей площади чашки.

2. Тем или иным приемом определяют среднее число колоний, которое выросло на площади 1 см². Предварительно вычисляют площадь чашки по формуле S=πR². Стандартная чашка имеет радиус 5 см, следовательно, ее площадь равна 3,14 х 25 = 78 см².

Среднее число колоний, выросших на площади 1 см², умножают на площадь чашки. Полученное число выражает общее количество колоний, которое выросло на всей поверхности чашки.

а) использование трафарета (шаблона).

Со стороны дна чашки накладывают трафарет, который имеет пять окон, площадь каждого из них составляет 1 см². Подсчет колоний осуществляется в пяти окнах, после чего общее количество колоний делят на пять, получая среднее число колоний, выросших на площади в 1 см².

б) использование счетной камеры.

Она представляет собой стеклянную пластинку, укрепленную на деревянной подставке. Пластинка разделена на 144 квадрата, каждый из которых равен 1 см²; квадраты, расположенные по диагонали, в свою очередь разделены на 9 малых квадратов каждый.

Для подсчета колоний чашку помещают под стеклянную пластинку вверх дном и подсчитывают число колоний в 10 квадратах (еcли колоний много, считают в малых квадратах). Определив среднее число колоний на 1 см² среды, умножают это число на площадь всей чашки и таким образом вычисляют число колоний на всей поверхности среды.

в) использование аппарата для подсчета колоний.

Принцип подсчета в этом случае остается таким же, как и в счетной камере. Вместе с тем аппарат имеет дополнительные приспособления, позволяющие ускорить подсчет колоний. Для этого он имеет стационарную лупу, подсветку со сменными светофильтрами, авторучку с датчиком; одновременно с отметкой колоний количество их фиксируется на счетчике (рис. 53).

Рис. 53. Аппарат для подсчета колоний бактерий: 1 – столик для чашки Петри; 2 – маркер с датчиком; 3 – счетчик; 4 – тумблер для включения импульсного счетчика; 5 – тумблер для включения подсветки

При обработке данных по определению количества бактерий в исследуемых объектах принимают во внимание следующие положении;

1. Оценивают только те разведения, при посеве которых выросло на чашках от 30 до 300 колоний.

2. Полученные результаты округляют:

Таблица 4

3. Для определения общего числа бактерий в исследуемых объектах (в почве, в кормах... в 1 г, в воде в 1 мл) необходимо полученное число колоний умножить на степень разведения исследуемого материала. Например, при посеве 1 мл воды в разведении 1:10 на чашках выросло 120 колоний. Содержание бактерий в 1 мл воды составляет: 120 • 10 = 1200 бактерий

Поиск по сайту: