Определение вирулентности микробов

При изучении свойств патогенных микробов в ряде случаев производят определение их вирулентности. Это необходимо для идентификации микробов, выделенных от больных, носителей и из внешней среды, характеристики силы вакцины, выявление напряженности иммунитета у животных и т.д.

Вирулентность микробов выражается МLD – минимальной смертельной дозой, то есть минимальным количеством микробов, вызывающих гибель животного определенного вида, и LD50 – дозой, вызывающей гибель 50 % зараженных животных.

Определение МLD. Для этой цели пользуются культурами, выращенными на плотных или жидких питательных средах. Культуры на плотных питательных средах смывают 0,85%-ным раствором поваренной соли и устанавливают определенное количество микробных тел в 1 мл, пользуясь оптическим стандартом. Культуры, выращенные на жидких питательных средах, разводят то или иное количество раз. Минимальная смертельная доза может резко варьировать в зависимости от вида и штамма микроба, а также вида животного, места введения и других факторов. Например, для определения вирулентности возбудителя пастереллеза; 18-часовую агаровую культуру Р. multocida смывают физиологическим раствором и устанавливают содержание микробов по оптическому стандарту до 1 млрд. в 1 мл.

В первый ряд пробирок наливают пипеткой 1,8 мл физиологического раствора.

Затем в первую пробирку вносят 0,2 мл из основного разведения культуры микроба, получая разведение 500 млн. микробных тел.

Далее делают разведение 250, 125, 62,5 млн/мл и т.д., каждое разведение готовят отдельной стерильной пипеткой.

Содержимое каждой пробирки вводят подкожно белым мышам массой 18-20 г.

За животными наблюдают в течение 10 дней, отмечая погибших животных. Минимальное количество микробов, вызвавшее гибель белой мыши, принимается за МLD.

Определение LD50. В настоящее время этот метод определения вирулентности микробов более достоверный и менее зависит от индивидуальной чувствительности животного.

Из культуры бактерий или вирусов делают десятикратные разведения. Каждое разведение вводят нескольким животным.

Очень трудно подобрать такое разведение, которое вызывало бы гибель 50 % животных, поэтому в настоящее время применяется метод статистического учета и исчисления LD50, предложенный Л. Ридом и X. Менчем. При исследовании материала, разведенного от 10^-1 до 10^-8, потребуется 8 групп животных. После прекращения наблюдения отмечают количество погибших животных в каждой группе и определяют LD50 при помощи специальных таблиц.

Проведение дермонекротической пробы.

Она применяется для выявления некротоксина, содержащегося в фильтрате бульонной культуры.

Для этого у кролика белой масти на боковой поверхности выбривают участок кожи и дезинфицируют, внутрикожно вводят 0,2 мл исследуемого материала. При положительной пробе вначале отмечают гиперемию, затем отек и в последнюю очередь некроз (обычно через 2 – 3 дня).

Поиск по сайту: