Дифференциально-диагностические среды

Жидкие среды Гисса. Для их приготовления используется 1%-ная пептонная вода (рН=7,0) с 0,5 % соответствующего углевода и индикатора (бромтимолблау, Андредэ и др.). Улавливание газа производится путем помещения на дно пробирки поплавков (стеклянных трубок), запаянных с одного (верхнего) конца.

Для улавливания пузырьков газа можно также к жидкой среде Гисса добавить 0,5 % агар-агара.

Рис. 13. Аппарат Коха

Стерилизуют среды Гисса при 110° в течение 10 минут или текучим паром в течение 30 минут 3 дня подряд.

В настоящее время среды с углеводами выпускают в сухом виде фабричным способом. Они состоят из питательного агара, соответствующего углевода и индикатора ВР (смесь водного голубого красителя с розоловой кислотой). Для приготовления полужидкой среды 2 г сухой среды растворяют при подогревании в 100 мл дистиллированной воды и доводят до кипения, разливают в стерильные пробирки и стерилизуют 10 минут при 110° или дробно. Среда имеет цвет питательного агара.

При ферментации углеводов с образованием кислоты наблюдается посинение среды, с образованием щелочи – покраснение.

Для выделения чистой культуры возбудителей кишечных болезней и их дифференциации с Е. coli длительное время использовались среды Эндо и Левина, в настоящее время применяется главным образом среда Плоскирева.

Среда Эндо, выпускаемая в сухом виде, готовится следующим образом: 5 г порошка растворяют при подогревании в 100 мл дистиллированной воды, кипятят 2-3 минуты при постоянном помешивании и разливают в чашки.

При отсутствии сухой среды Эндо она может быть приготовлена ех tempore. К 100 мл стерильного расплавленного МПА добавляют 1 г лактозы, растворенной и прокипяченной в 5 мл дистиллированной воды, и 1 мл насыщенного спиртового раствора основного фуксина, обесцвеченного перед добавлением к агару 10%-ным водным раствором сульфита натрия до бледно-розового оттенка. Среду смешивают, разливают по чашкам и подсушивают в термостате.

Е. coli ферментирует лактозу с образованием кислоты. Обесцвеченный фуксин в среде Эндо с изменением реакции в кислую сторону приобретает первоначальный цвет, что и обусловливает красный с металлическим блеском цвет колоний Е. coli. Патогенные бактерии – возбудители кишечных болезней – не ферментируют лактозу и растут на среде Эндо в виде бесцветных колоний.

Среда Левина. Сухая среда Левина готовится аналогично сухой среде Эндо. При необходимости она может быть приготовлена ех tempore. К 100 мл стерильного расплавленного питательного агара добавляют 2 г лактозы, растворенной и прокипяченной в небольшом количестве дистиллированной воды, 2 мл 0,5%-ного предварительно прогретого водного раствора метиленовой сини и 1,5 мл 1%-ного водного раствора эозина (растворы красителей готовят заранее, стерилизуют текучим паром), 0,2 г двухосновного фосфорнокислого калия (К₂НРО₄), среду перемешивают и разливают по чашкам. Среда темно-лилового цвета. Колонии Е. соli имеют сине-черный цвет, бактерии, не ферментирующие лактозу, образуют бесцветные колонии. Данная среда, как и среда Эндо, используется в настоящее время главным образом для выделения Е. соli.

Среда Плоскирева содержит сухой питательный агар, набор различных солей, соли желчных кислот, бриллиантовую зелень и нейтральный красный индикатор. Е. соli в связи с подавлением ее жизнедеятельности солями желчных кислот и бриллиантовой зеленью, растут на этой среде скудно, в виде колоний розового цвета. Микробы из воздуха не растут (чашки в открытом виде подсушивают на воздухе в течение 1 часа). Патогенные бактерии сальмонеллы образуют на среде бесцветные прозрачные колонии.

Поиск по сайту: