Растворимости по Биуретовому методу

Для анализа белковых веществ используют много методов, включая различные модификации метода Кьельдаля, фотометрические методы с использованием спектрофотометров и фотоэлектроколориметров.

Среди ускоренных фотометрических методов большое признание получила биуретовая реакция.

На основе информации о количественном соотношении белковых фракций можно провести реальное прогнозирование функционально-технологических свойств сырья, особенно при получении продуктов заданного качества.

Определение фракционного состава

белков растительного происхождения

на основе их способности к растворению

Аппаратура и реактивы. Дистиллированная вода; сывороточный альбумин; биуретовый реактив; фотоэлектроколориметр (ФЭК-56М); настольная центрифуга; часовое стекло; пипетки; пробирки; технические весы; мерные цилиндры вместимостью 10 см³.

Приготовление реактивов. Биуретовый реактив. 1,5 г CuSO₄ 5Н₂О и 6,0 г NaKC₄H₄O₆ - 4Н₂О растворяют в 500 см³ воды, при постоянном перемешивании добавляют 300 см³ раствора гидроксида натрия массовой долей 10 %. Общий объем доводят дистиллированной водой до 1000 см³.

Количественное соотношение различных фракций, их состояние определяют не только технологические свойства сырья и продуктов, но и их биологическую ценность.

Подготовка проб к анализу. Навеску зерна 3 – 4 г тщательно измельчают. К навеске измельченного сырья приливают дистиллированную воду (альбумины), солевой раствор KCl (глобулины), водно- спиртовый раствор с объемной долей 70 % (проламины), раствор щелочи (глютелины) в соотношении 1: 6 (по массе) и проводят экстрагирование в течение 1 часа при периодическом перемешивании. Затем центрифугированием при частоте вращения 2000 с^-1 в течение 10 мин отделяют осадок. Надосадочную жидкость осторожно декантируют и используют для количественного определения белков.

Проведение анализа. Для проведения цветной реакции к 1 см³ исследуемых растворов белков (фракции: водорастворимая, солерастворимая и щелочерастворимая) добавляют 4 см³ биуретового реактива. Смесь оставляют в покое при температуре (20 ± 5) ^оС в течение 30 мин. По истечении времени образования окрашенного комплекса измеряют оптическую плотность раствора при длине волны 540 – 560 мкм на фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром.

Для того чтобы определить содержание белка в любой зерновой фракции, нужно снять показания оптической плотности, найти это значение на оси ординат калибровочного графика и определить соответствующую концентрацию белка на оси абсцисс.

Построение градуировочного графика. Для построения градуировочного графика готовят ряд последовательных разведений стандартного раствора белка, в качестве которого используют кристаллический сывороточный альбумин: 0,01 г белка растворяют в 100см³ дистиллированной воды, отбирают 1 см³ и доводят объем до 10 см³.

С пробами из каждого разведения белка проводят биуретовую реакцию в условиях, соответствующих описанию метода, и измеряют оптическую плотность окрашенных растворов. Затем строят график D = f(с), пример которого приведен на рис. 8.

Контрольные вопросы

1. Какова характеристика азотистым соединениям, как основных компонентов растительного сырья?

2. Возможно ли разграничить понятия «белковый и небелковый» азот?

3. Каким образом осуществляют метод определения общего азота по методу Къельдаля?

4. Каковы сущность и ход работы Биуретового метода определения белков (в модификации Дженнингса)?

Содержание белка, мг

Рис. 8. Градуировочный график

5. Какие методы определения аминного азота существуют?

6. Каковы сущность и ход работы по осуществлению метода формольного титрования?

7. Каков ход работы по определению аминного азота йодометрическим методом (по Попу и Стивенсу)?

8. Какова суть определения содержания аминного азота с нингидриновым реактивом?

9. Каковы основные положения метода гель-фильтрации растворов растительных белков?

10. Каким образом осуществляют определение массовой доли белка методом Лоури в модификации Дэвени и Гергей?

11. Каков алгоритм анализа фракционного состава белка на основе их растворимости по Биуретовому методу?

Поиск по сайту: