 |
юБРНюБРНЛЮРХГЮЖХЪюПУХРЕЙРСПЮюЯРПНМНЛХЪюСДХРаХНКНЦХЪаСУЦЮКРЕПХЪбНЕММНЕ ДЕКНцЕМЕРХЙЮцЕНЦПЮТХЪцЕНКНЦХЪцНЯСДЮПЯРБНдНЛдПСЦНЕфСПМЮКХЯРХЙЮ Х ялххГНАПЕРЮРЕКЭЯРБНхМНЯРПЮММШЕ ЪГШЙХхМТНПЛЮРХЙЮхЯЙСЯЯРБНхЯРНПХЪйНЛОЭЧРЕПШйСКХМЮПХЪйСКЭРСПЮкЕЙЯХЙНКНЦХЪкХРЕПЮРСПЮкНЦХЙЮлЮПЙЕРХМЦлЮРЕЛЮРХЙЮлЮЬХМНЯРПНЕМХЕлЕДХЖХМЮлЕМЕДФЛЕМРлЕРЮККШ Х яБЮПЙЮлЕУЮМХЙЮлСГШЙЮмЮЯЕКЕМХЕнАПЮГНБЮМХЕнУПЮМЮ АЕГНОЮЯМНЯРХ ФХГМХнУПЮМЮ рПСДЮоЕДЮЦНЦХЙЮоНКХРХЙЮоПЮБНоПХАНПНЯРПНЕМХЕоПНЦПЮЛЛХПНБЮМХЕоПНХГБНДЯРБНоПНЛШЬКЕММНЯРЭоЯХУНКНЦХЪпЮДХНпЕЦХКХЪяБЪГЭяНЖХНКНЦХЪяОНПРяРЮМДЮПРХГЮЖХЪяРПНХРЕКЭЯРБНрЕУМНКНЦХХрНПЦНБКЪрСПХГЛтХГХЙЮтХГХНКНЦХЪтХКНЯНТХЪтХМЮМЯШуХЛХЪуНГЪИЯРБНжЕММННАПЮГНБЮМХЕвЕПВЕМХЕщЙНКНЦХЪщЙНМНЛЕРПХЙЮщЙНМНЛХЙЮщКЕЙРПНМХЙЮчПХЯОСМДЕМЙЖХЪ
количество молекул в кванте
Хотя из экспериментов Катца, Фетта и Кастильо было очевидным, что один квант в нервно-мышечном соединении содержит более одной молекулы АХ, истинное количество молекул в одном кванте оставалось неизвестным. Куффлер и Йошиками первыми получили такого рода оценку, используя очень тонкие пипетки для ионофореза АХ на постсинаптическую мембрану мышцы змеи 24). Ответ,
Глава 11. Высвобождение медиатора 225
| Рис. 11.11. Количественный анализ АХ выделяемого из микропипетки при ионофорезе. (А) Капелька жидкости, покрытая масляной пленкой, забирается из капилляра. (В) АХ инъецируется в эту капельку серией ионофоретических пульсов, которые использовались для воспроизведения спонтанных миниатюрных потенциалов (см. рис. 11.10В). (С) После измерения объема заполненная АХ капелька касается поверхности между маслом и раствором Рингера в области концевой пластинки мышцы змеи, и высвобождает свое содержимое в водную фазу. Деполяризация концевой пластинки, вызываемая этой капелькой, сравнивается с деполяризацией, вызванной капельками с известной концентрацией АХ. Когда концентрация АХ в тестовой капельке определена, можно рассчитать количество АХ высвобождаемого при одном ионофоретическом пульсе. Fig. 11.11. Assay of ACh Ejected from a Micropipette by ionophoresis. (A) A droplet of fluid is remcved from the dispensing capillary under oil. | 
(B) ACh is injected into the droplet by a series of ionophoretic pulses, each identical to that used to mimic a spontaneous miniature potential (see Figure 11.10B). (C) After its volume is measured, the ACh-loaded droplet is touched against the oil-Ringer interface at the end plate of a snake muscle, discharging its contents into the aqueous phase. The depolarization of the end plate is measured (not shown) and compared with that produced by droplets with known ACh concentration. Once the concentration in the test droplet is determined, the amount of ACh released per pulse from the electrode can be calculated. (After Kuffter and Yoshikami. 1975b.)
|
вызываемый коротким пульсом АХ, практически полностью совпадал со спонтанными миниатюрными потенциалами (рис. 11.10). Для измерения количества молекул, выделяемых из пипетки, АХ выделялся повторными пульсами в капельку раствора (около 0,5 мкл), находящегося под слоем масла (рис. 11.11). Эта капелька затем наносилась на концевую пластинку мышечного волокна змеи и измерялась результирующая деполяризация. Ответ сравнивался с ответами на капельки точно такого же размера, содержащие известные концентрации АХ. Таким образом были определены концентрации АХ в тестирующей капельке и количество молекул АХ, высвобождаемых каждым пульсом. Пульс АХ, воспроизводящий спонтанный миниатюрный потенциал, содержал примерно 7 000 молекул
оНХЯЙ ОН ЯЮИРС: